文档介绍：1、细胞的分化潜能干细胞可分为哪几种类型?各类干细胞有何特性。答:依据干细胞的分化潜能,可分为三种类型:全能性干细胞、多能性干细胞、单能干细胞。全能性干细胞具有形成完整个体的分化潜能;多能性干细胞具有分化出多种细胞组织的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力,发育潜能受到一定的限制;单能(定向)细胞(也称专能或偏能干细胞),这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化,多数的组织或器官干细胞属于这一类。3、干细胞有何特性,如何验证胚胎干细胞的全能性?答:胚胎干细胞具有全能性,可以自我复制(或更新)并具有分化为体内所有组织的能力。胚胎干细胞的鉴定:①形态学检测:细胞呈圆形、核大、胞浆少;细胞排列紧密,呈集落形生长;集落常呈岛状、巢状。②遗传学检测:为正常的二倍体核型;③酶活性检测:ES细胞内端粒酶和碱性磷酸酶活性高;④细胞表面标志物检测:ES细胞膜表面有特殊的标记:如,OCT-4,SSEA-3,SSEA-4等;⑤体内分化潜能:植入裸鼠皮下,可诱发形成畸胎瘤;可分化为三个胚层的细胞;能参与嵌合体的形成;⑥体外分化潜能:可形成类胚体,可在体外诱导分化为三个胚层的细胞。体外培养细胞有哪些类型?其生长特点有什么区别?(一)体外细胞培养物的生长类型体外培养的细胞根据其生长方式,主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。按照培养细胞粘附生长时的主要形态,主要分两类:上皮细胞型和成纤维细胞型,其它为不定型(游走型细胞、多形型细胞)。上皮细胞型:来源于外胚层,内胚层细胞,类似体内的上皮细胞,呈扁平不规则多角形,中有圆形核。生长特点:易相连成片,相靠紧密相连成薄层铺石状,生长时呈膜状移动,很少脱离细胞群而单个活动成纤维细胞型:由中胚层间充质组织起源的组织,似体内成纤维细胞的形态,呈梭形或不规则三角形,胞质向外伸出2—3个长短不等的突起,中有卵圆形核生长特点:排列成放射状,漩涡状并不紧靠连成片,细胞—细胞接触易断开而单独行动。游离的单独的成纤维样细胞,常有几个伸长的细胞突起悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面,而在悬浮状态下即可生长的细胞。特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形,单个或小细胞团。优点:生存空间大,提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获,可获得稳定状态。缺点:观察不方便,很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)。6、培养细胞的生长特点(一)贴附:基本生长特点。(细讲以成纤维细胞为例P39)(二)接触抑制:一种由细胞接触而抑制细胞运动的现象。可作为区别正常细胞与癌细胞(无接触抑制)标志之一(三)密度抑制:当细胞密度逐步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多,细胞因营养的枯竭和代谢的影响,而分裂停止的现象。7培养细胞的生长和增殖过程组织培养细胞生命期所谓培养细胞生命期,是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及衰退期。原代培养期:也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1-4周。特点:细胞呈活跃移动,可见细胞分裂,但不旺盛。与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。传代期:当细胞增殖达到一定密度后需要分离出一部分细胞和更新营养液,以继续细胞的生存的过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系。特点:在全生命期中此期的持续时间最长,细胞增殖旺盛,并能维持二倍体核型。衰退期:此期细胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖,最后衰退凋亡。体外培养细胞一代生存期所谓细胞的“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。每代细胞一般要经过三个生长阶段。问题1、什么是原代培养与传代培养?原代细胞培养有哪些方法?各自的适用范围是什么?答:原代培养也称初代培养期,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1~4周。传代培养是指原代细胞生长一定时间后,如是贴附型细胞就会连接成片而铺满瓶底,这时需将原代细胞分开至多个新的培养瓶中,这个过程称为传代,初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。(课本54页)原代细胞培养的方法有:组织块培养法、单层细胞培养法、悬浮细胞培养法。组织块培养法特别适合于组织量少的原代培养;单层细胞培养法尤其适用于细胞建系和大量组织的培养,用于少量培养工作时稍显繁琐;悬浮细胞培养法对悬浮生长的细胞如白细胞、骨髓细胞和胸水、腹水等癌细胞,可直接接种进行原代培养。2、常用的组织细胞分离方法有哪几种?答:分散组织的方法有机械法分离和消化分离法两种;根据组织种类和培养要求,宜采用相应的方法。(1).机械分离法:;(2).消化分离法:(螯合剂消化法3、贴壁细胞传代时采用何种方法?其技术关键是什么?答:贴壁细胞