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人呼吸道合胞病毒融合蛋白真核表达及纯化中文摘要目的:人呼吸道合胞病毒琑惴悍植加世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法,世界卫生组织将发展呙缌形W钣畔确⒄沟囊呙缦钅恐弧T赗所编码的种蛋白中,融合蛋白,为跨膜糖蛋白,直接介导病毒与细胞的融合、病毒的穿入、合胞体的形成,而且鞍自赗不同亚型间具有高度的抗原同源性,是主要的交叉保护性抗原,同时还有细胞毒性馨拖赴识别的抗原表位。本研究尝试采用重组真核表达载体,瞬时转染细胞表达鞍祝貌僮骷蛞住⒋炕矢叩腘缀筒阄龇ㄍ瓿芍票负痛炕竦高纯度、级的鞍祝=徊降恼锒鲜约良耙呙绲妊芯康於ɑ 方法:根据编码鞍椎幕蛐蛄猩杓撇⒑铣梢铮员臼笛槭冶4娴暮蠪基因的质粒D0澹肞方法,扩增出舜鳫标签和凝血酶裂解位点的蛐蛄校寺。,经核酸序列分析后,进一步克隆到真核表达载体.,限制性内切酶鉴定,用脂质体转染笥肦甈鉴定基因转录,笤儆肳和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达和分布。柱亲和层析法纯化细胞表达的鞍祝高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果:核酸序列分析证实获得带昵┑腞蛐蛄校挥蟹⑸抟逋槐洹真核表达载体./瓾的限制性内切酶分析结果与预期一致。转染细胞后,检测到蛴凶B迹琖分析观察到鞍滋匾煨缘谋泶条带,间接免疫荧光实验观察到鞍字饕3誓ぜ鞍植肌‵.鞍状炕安徽医科大学硕士学位论文一陆燕燕细胞,
%以上。结论:初步建立了鞍渍婧吮泶锛按炕椒ǎ=徊接呕疪鞍字票条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。关键词:人呼吸道合胞病毒;颍徽婧吮泶铮淮炕安徽医科大学硕士学位论文一陆燕燕
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人呼吸道合胞病毒融合蛋白的真核表达及纯化把鞘狼欠段诘贾掠び锥潞粑栏腥咀钪匾5牟《静≡澹痹诶人和免疫力低下人群中,腥疽灿泻芨叩姆⒉÷屎椭滤缆省緇】。本病在婴幼儿的发病高峰期为出生后的堋个月,尤其是前三个月,出生一年内约%婴儿被感染,晔奔负跛卸家迅腥竟】。该病毒传染性强,症状与副流感病毒肺炎、轻症流感病毒肺炎及轻症腺病毒肺炎在临床上几乎无法区别,主要表现为鼻炎、咽炎、细支气管肺炎、支气管炎及肺炎。迄今为止,对腥救匀蝗狈τ效的特异性预防和治疗方法,世界卫生组织及美国医学研究院有关世纪疫苗报告中均将开发呙缌形W钣畔确⒄沟囊呙缦钅恐弧,。粲诟别げ《究品窝撞《臼簦浠蜃槲3ぴ不分节段的单股负链嗦值鞍祝种跨膜的包膜糖蛋白诤系鞍譌、黏附蛋白托∈水蛋白种核衣壳蛋白说鞍譔、磷蛋白⒋缶酆厦秆堑ノ籐和转录延长因子.,址墙峁沟鞍蚇种基质蛋白种鹘谝子】。其中,膜表面融合蛋白驼掣降鞍譍为中和抗原,能够刺激机体产生中和抗体,是饕5谋;ば钥乖蛋白通过与宿主细胞膜受体结合,介导病毒进入宿主细胞内,而鞍拙赴呀饷噶呀馕狥虵缶哂猩镅Щ钚裕能使病毒包膜和宿主细胞膜融合形成多核巨细胞。鞍资且恢諭涂缒ぬ堑鞍祝它是峁沟鞍字斜湟熳钕灾牡鞍祝軬蛋白氨基酸序列的差异,将为两个抗原亚型。鞍资且桓龅湫偷腎型糖蛋白,即含有一个裂解的诵藕判蛄泻臀于说摹懊G。全长霭被幔喽苑肿恿吭奘魏笤腥鞠赴螅現蛋白首先合成前体,没有活性,,其相对分子量分别为安徽医科大学硕士学位论文一陆燕燕
和通过二硫键相连【俊蛋白对于此凳遣豢扇鄙俚模琑生命周期里最关键的一步就是侵入宿主细胞,而这一步由鞍桌唇榈迹現蛋白直接介导病毒与细胞的融合及合胞体形成【浚訤蛋白已成为研究脑し馈⒄锒虾椭瘟频闹要候选蛋白。作为钪匾5闹泻涂乖現蛋白表面存在大量的中和抗原识别表位,目前在已知的隹乖坏阒校琁ⅱ簟、Ⅵ均为中和性抗原位点,各个抗原位点又包含若干个抗原表位,且多为构象性表位。在电镜下观察木褰峁梗是由三个单体形成的楔形结构,分成头、颈、柄三部分,头颈区域包含