文档介绍：通过抑制消减杂交确定油菜胚组织中的不同的表达序列
植物细胞组织器官培养(2006)86:417-421
摘要:一个差减cDNA文库包含576个克隆它们的结构是彼此分离的表达在油菜的前胚组织中。通过不同的筛选,只有16种被鉴定是潜在的阳性。最后,只有3种BNPE DG3, BNPE AE4 和BNPE EG。在Northern分析中被确认上调在PEC油菜胚栽植。这是第一个研究报告关于Ae4, Dg3和Eg1顺序在油菜PEC的胚表达上并且联合胚体在油菜的再生胚组织中。Ae4编码了一个假定的富含脯氨酸蛋白质,Dg3编码脂质转移样蛋白和Eg1编码了napin,有很多数量BNMNAP子家族。
关键词:再生胚胚胎能力不同基因表达 SSH 甘蓝型油菜
缩略语:
SSH 抑制差减杂交
NEC 无胚胎组织
PEC 前胚组织
BNPE 甘蓝型前胚组织
介绍:
甘蓝型油菜再生胚组织中不需要荷尔蒙去刺激胚胎发育(源自1982年),经过一段时间的栽植已经形成了一个稳定的胚胎并且消除了前胚阶段。(Loh 1982; Namasivayamet ).这个系统被用作分离和识别特异基因通过抑制差减杂交特别上调在前胚阶段。(Diatchenko et al. 1996),无胚组织tissue (NEC) was used as a control被用作对照tissue against which to detect the up-regulation of组织,以此来检测上调genes in pre-embryogenic tissue (PEC).前在基因中的胚组织,无胚组织is hypocotyl tissue of seedlings grown from germinated是生长发芽seed (Loh 1982 ) under the same experimental种子长成幼苗形成胚轴组织(洛 1982年)在相同的实验conditions as the embryogenic culture, and胚培养的条件下,并没有表达任何能力对于再生胚胎。
甘蓝型油菜过磷酸钙的NEC和PEC,最初产生被用来描述Namasivayam等(2006)。聚甲和mRNA的purified by using Promega PolyATract _ mRNA纯化通过试剂盒吸收聚乙烯和信使核糖核酸。不同的生物细胞系和生物分子生物学,生物技术和生物分子的能力。
hi 方法(1987). SSH文库构建根据制造商指示的PCR –选择TM基因差减kit(Clontech公司)之前的SSH是利用 cDNA从PEC合成mRNA的'测试'和从NEC公司(控制')驱动程序'加以丰富,这是在上调的基因甘蓝型油菜中正向消减试验测试基因
-TOPO,和化学转化成Shot 十大活跃细胞。(Invitrogen公司美国)。对于反向减法,减法杂交是执行NEC中的mRNA携带的cDNA组织作为一个“测试者”,和来自PEC中的mRNA携带的cDNA组织作为一个“司机”。SSH文库的建立导致孤立了576个白色克隆,甘蓝型油菜前胚(BNPE)的克隆,使BNPE通过PCR扩增嵌入在内。利用嵌入适配器处理剂去识别重组克隆并且决定被嵌入576个克隆的大