文档介绍：一、实验目的通过小白鼠骨髓细胞染色体的制备,、种类及小白鼠等动物染色体的数目及特点二、实验原理骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞,从这些分裂细胞中,可观察到处于分裂中期的染色体,能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞的原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析。首先,为了获得较多的中期分裂相骨髓细胞,必须给动物注射一定剂量的秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用,当动物被注射适量的秋水仙素后,处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成,中期染色体不能正常趋向两极,因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次,为了能够清楚的观察染色体的形态,取出的骨髓细胞要经过低渗(KCl溶液)处理使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定(甲醇:冰醋酸)使染色体保持完好的形态。染色(Giemsa液)使染色体易分辨、观察。二、实验原理(continued)::﹪秋水仙素,%***化钾(KCl),Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa染液,(),2%柠檬酸钠。:离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻片和盖玻片、染色缸、玻片盒三、实验用品四、:-3小时,,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。,剔去肌肉组织,:吸取2%柠檬酸钠,注射器针头插入骨一端,反复冲洗骨髓,,:%KCl溶液,37oC低渗20分钟,中间(约10分钟)用吸管吹打二次,使细胞分散,悬浮于溶液中。:1200rpm离心5分钟后弃去上清液,:加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀,室温下静置20分钟,每10分钟时吹打一次。:1200rpm离心6分钟,弃上清液。:,吸管吹打成细胞悬液。:用吸管吸取细胞悬液,滴在预冷的载玻片上,:10%Giemsa染液染色30分钟四、实验步骤(continued)在显微镜下观察Giemsa染色之后的染色体片(染色体呈紫红色),找出分散适度的中期染色体图象,观察小白鼠的染色体形态,统计其染色体数目。制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理,细胞膜和质已被去掉,镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起,其外也无细胞膜包裹,染色体之间无重叠,易分辨,臂的长度适中。但最重