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...
一种广泛适用的提取方法木
淳俊郑彦峰王胜华“陈放
四川大学生命科学学院,成都
摘要分离提取高质量的是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而、多糖及多酚类物质严重干扰的
,结合、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的
, 富含的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等多种
提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,,提取的能够用于后续的
, 将分离提取的总经过与
加沉淀步骤有效地去除了大片段,以水稻的成熟序列设计特异引物做茎环,结果
证明,富集得到的小可以用于克隆等后续实验.
关键词硅藻土,提取,小,乙二醇丁醚
学科分类号
获得完整性良好的一直都是致力于基因
表达调控研究的分子生物学者所面临的挑战性课题. 材料和方法
尽管已经建立起许多分离提取方、法【并开发. 实验材料
出若干分离提取试剂盒,但是,仍有不少实植物:富含多酚的麻疯树幼叶、蓖麻树幼叶、
验材料由于富含的酶、多糖、多酚等物质或乌桕树幼叶、银杏树幼叶、芦荟叶片,富含多糖的
者降解,或者与形成难溶物等方式严重灌浆期玉米胚乳,水稻幼苗以及油脂丰富的麻疯树
干扰的提取】,常常导致实验的失败. : :
另一方面, ,, 等小木霉、酵母.
是基因表达调控的重要分子,广泛调控生物. 主要仪器
的发育、代谢以及抵抗异常病毒、转座因子冷冻离心机:公
:.Ⅲ型稳压仪北京六一仪器
性】.:
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化也是一项重要的基础工作. 目前,小的提公司.
~, . 方法
其纯化过程繁琐复杂,得率低. .. 主要试剂.、购自公
本文报道利用硅藻土能够有效吸附酶
的特性,结合高盐、及乙二醇丁醚沉淀等过
程,
应性广,可以从富含及多糖、多酚等代谢· 国家自然科学基金和四川大学科研启动基金资助项目
产物提取困难的动、植物及微生物材料中提”通讯联系人.
取高质量总,通过结合与加:·,·:..
收稿日期:..,接受日期:.
沉淀去除大片段,有效富集了小.
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·· 生物化学与生物物理进展...
司;琼脂糖为公司产品;硅藻土、,
.、氯仿、异戊醇、/.、实验方法按说明书进行.
%乙醇、无水乙醇、乙二醇丁醚、、柠檬酸..完整性分析及质量检测.
钠、、、一巯基乙醇、水不溶性聚乙烯吡. 电泳分析. 的完整性用%非变
咯烷酮、/、/、% 性琼脂糖凝胶电泳,然后用紫外凝胶成像系统观察.
、/等均为国产分析纯试剂. . 纯度鉴定. 取样品, 用.
.. 溶液制备. 稀释倍, 紫外分光光度计测量其在、
. 硅藻土的处理: 硅藻土用和处