文档介绍：实验五 果蝇的双因子杂交实验湖州师范学院生命科学学院生物系一、实验目的:1、通过两对性状个体杂交,观察F2的分离现象及其比例,了解两对非等位基因间的自由组合现象。2、掌握果蝇的杂交技术,并学会记录交配结果和掌握统计处理方法。二、实验材料:灰体残翅:EEvgvg黑檀体长翅:eeVgVg果蝇的灰体基因(E)与黑檀体基因(e)为一对相对性状,位于Ⅲ,而长翅(Vg)与残翅(vg)为另一对相对性状,位于Ⅱ。这两对基因是没有连锁关系的,位于不同染色体上的非等位基因。三、实验仪器设备:体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。***、酵母粉、蔗糖、丙酸、玉米粉等。根据非等位基因分离的自由组合定律,在F1代产生配子时,非等位基因的分离是独立的,它们彼此自由组合,产生四种基因型的配子(EVg,Evg,eVg,evg),且它们的比例相同。这四种配子自由结合,因此在F2代会出现9种基因型的后代,若显性完全,就出现4种表型,比例为9:3:3:1。四、实验原理:正交P:灰体残翅(♀)×黑檀体长翅(♂)EEvgvgeeVgVg↓F1:灰体长翅EeVgvg自交F2:EVg1/4Evg1/4eVg1/4Evg1/4EVg1/41/161/161/161/16Evg1/41/161/161/161/16eVg1/41/161/161/161/16Evg1/41/161/161/161/161EEVgVg1EEvgvg9E_Vg_2EEVgvg2Eevgvg2EeVgVg1eeVgVg4EeVgvg 2eevgvg1eevgvg3E_vgvg3eeVg_五、实验步骤:1、选处女蝇:每组做正交1瓶,正交选灰体残翅为母本,黑檀体长翅为父本,将母本旧瓶中的果蝇全部麻醉处死,在8-12h内收集处女蝇5只,将处女蝇和5只黑檀体雄蝇转移到新的杂交瓶中,贴好标签,于25℃培养;2、7d后,释放杂交亲本;3、再过4-5天,F1成蝇出现,在处死亲本7天后,集中观察记录F1表型;4、选取5对F1代果蝇,转入一新培养瓶,于25℃培养,其余F1代果蝇处死;5、7d后,处死F1亲本;6、再过5d,F2成蝇出现,开始观察记录,连续统计7d;注意:双因子杂交也可做反交,但因残翅果蝇不能飞,只能爬行,用做母本比较好。六、实验结果:1、观察并统计正、反交F1代表型及个体数,分析相对性状间的显、隐性关系;2、观察并统计正、反交F2代表型及各种表型的个体数,特别要注意新性状组合个体的出现。计算不同表型个体数的比例,确定这两队基因的遗传规律;观察结果统计日期灰体残翅(♀)×黑檀体长翅(♂)灰体长翅数灰体残翅数黑檀体长翅数黑檀体残翅数F1代:观察结果统计日期(♀)×(♂)灰体长翅数灰体残翅数黑檀体长翅数黑檀体残翅数合计F2代:对F2代的统计结果做x2测验:灰体长翅数灰体残翅数黑檀体长翅数黑檀体残翅数实际观察数(O)预期数(E)偏差(O-E)(O-E)2/E自由度=n-1=x2=∑(O-E)2/E=