文档介绍：实验名称: 鸡白痢诊断血清的制备
姓名:夏敏超学号:2013013910 组别:
实验设计的依据:鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染性疾病,世界各地均有发生,是危害养鸡业最严重的疾病之一。沙门菌H抗原为鞭毛抗原,属鞭毛蛋白质,不稳定,可经甲醛固定;O抗原为菌体抗原,属细胞壁脂多糖,性质稳定、耐热。将制备好的H、O抗原分别免疫健康家兔,家兔体内可产生高效价的抗H抗体和抗O抗体,并主要存在于兔血清中。
实验设计思路:
⑴接种经鉴定的沙门菌H90l菌株至普通琼脂平板内,37℃培养16~24h,挑选典型光滑型菌落转种至普通琼脂斜面,37℃培养18~24h。
⑵加5ml无菌肉汤至接种有细菌的普通琼脂斜面上,静置5~10min,搓动试管,制成细菌悬液。
⑶将细菌悬液种于15cm琼脂平板内,尽量铺平于培养基表面(可用涂布棒涂布),37℃培养16~24h。
⑷%甲醛生理盐水冲洗刮取菌苔,移入无菌三角瓶内,置37℃水浴24h,固定杀菌。
⑸取少许经甲醛生理盐水处理的菌液接种肉汤培养基作无菌试验。无菌生长者用无菌生理盐水稀释至5~10亿菌/ml(用Brown氏标准比浊管测定),即获得沙门菌H抗原,4℃保存备用。
采用经鉴定的沙门菌O90l菌株,方法同上。收获细菌时,取出大平皿,用适量生理盐水冲洗刮下菌苔,移入无菌三角瓶,100℃水浴2h杀菌(%石炭酸盐水冲洗刮下菌苔,置37℃水浴过夜杀菌)。作无菌试验合格后,用生理盐水稀释成5~10亿/ml,加入石炭酸至终浓度为5%即成O抗原菌液。4℃保存备用。
选用家兔检测其体内是否含有天然抗体(取兔耳缘静脉血,分离血清,分别与沙门菌H和O抗原做试管凝集反应),只选择不含伤寒沙门菌H和O抗原天然抗体的家兔进行免疫。最后,将家兔随机分为2组,做好标记。
免疫前,用生理盐水将沙门菌H和O抗原洗涤3遍,然后稀释至9亿菌/ml。兔耳缘经碘酒和酒精消毒后,从耳缘静脉注射抗原(分H抗原和O抗原两组),记录免疫日程。
末次注射后7~10d,抽兔耳静脉血1ml,分离血清与相应的抗原作试管凝集反应,若血清效价大于1∶1280,即可收获血清。若效价偏低,再用相应抗原3ml加强免疫1~2次,可使抗体效价明显升高。
试血合格后,经颈动脉