文档介绍：蚅薃莄本文由上海哈灵生物科技有限公司提供芁肇羂上海哈灵试剂供应商感谢您阅读本文袄羂蒇植物过氧化氢(H2O2)酶联免疫分析(ELISA)螇腿蚆试剂盒使用说明书膆莂肆本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及相关液体样本中过氧化氢(H2O2)的含量。蒈羆螁实验原理:芄袁螁本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢(H2O2)水平。用纯化的植物过氧化氢(H2O2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢(H2O2),再与HRP标记的过氧化氢(H2O2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化氢(H2O2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢(H2O2)浓度。膈肇肇蒃芀薄试剂盒组成:羈聿螄试剂盒组成螅蚀袁48孔配置虿袆蒈96孔配置袃莃芅保存葿羇薃说明书芆螃羁1份膀螅袈1份莄节螃羀螆莁封板膜蒃蚁肁2片(48)蚀袈肅2片(96)袅肁蒅莁蚅肀密封袋羃薀膁1个膁蚆蒆1个莆芃袃蚇螈膃酶标包被板蒄蚃芁1×48莈薅袇1×96薂肂蚅2-8℃保存膈蚆袂标准品:1800ng/××1瓶肃羁肃2-8℃××1瓶薄肄螅2-8℃保存肀薈蒀酶标试剂蚂蒃蒀3ml×1瓶袀莅螆6ml×1瓶肅袂芃2-8℃保存薀蒇蒃样品稀释液膃莂薀3ml×1瓶莁薈膇6ml×1瓶薅螁羄2-8℃保存肁芅节显色剂A液蚄膁蚀3ml×1瓶薈莇薇6ml×1瓶螂薀莂2-8℃保存芈蒈羀显色剂B液膅芃螀3ml×1瓶肈芅羈6ml×1瓶芃螃膄2-8℃保存蝿芇肃终止液蚅膂袀3ml×1瓶蕿莈膅6ml×1瓶螄薁袆2-8℃保存艿膆螂浓缩洗涤液肆羁罿(20ml×20倍)×1瓶羀膇薆(20ml×30倍)×1瓶芄蒀芄2-8℃保存螀芈薁莃膄罿样本处理及要求::切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。袄羂聿螇腿莈操作步骤:膆莂蒄标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200ng/ml,800ng/ml,400ng/ml,200ng/ml,100ng/ml)。蒈羆莃加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。芄袁腿温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。膈肇蒅配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。蒃芀膆洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。羈聿膂加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。螅蚀艿温育:操作同3。虿袆袆洗涤:操作同5。袃莃蚃显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。芆螃荿测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。膀螅芆莄节莅注意事项:羀螆羃试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。蒃蚁葿浓洗