文档介绍：微生物与免疫学实验(三)内容血清学反应(二):(三)免疫标记技术(录像)操作:ELISA示教:免疫荧光(C301)细菌学总论:细菌基本形态、特殊结构操作:革兰染色(三)免疫标记技术将已知抗体标记上显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有:酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。免疫荧光技术(荧光抗体技术)【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术,具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素(常用异硫***基荧光黄,简称FITC)与特异性抗体(或抗原)以共价键基团牢固结合,但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,而从荧光显微镜加以观察。【方法】主要有直接法和间接法。免疫荧光酶联免疫吸附试验(ELISA)(EnzymelinkedlmmunosorbentAassay)【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶(主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的高效催化作用有机地结合起来,并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时,可以催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。【方法】主要有间接法和双抗体夹心法常用底物:邻苯二***(OPD),四***联苯***(TMB)用于测定抗体ELISA:双抗体夹心法------用于测定抗原ELISA:双抗体夹心法检测HCG(操作)器材:1个小杯/1人,标本1、标本2A、B、C液(H2O2、TMB、HRP标记抗HCG二抗)方法:小杯内加标本两滴甩干、水洗三次加一滴C液(红色)甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白纸上,观察结果结果判断:蓝色为+*瓶盖不能盖错,小杯用后扔进杂物盆!!!5min5min