文档介绍：罿蛋白酶产生菌的筛选及活力的测定螀作者刘艳芝指导教师张玲秀***(忻州师范学院生物系1201班034000)蚂摘要:采用忻州师范学院校园附近土壤、农田土壤及体育场土壤作为样品,并从中筛选分离并得到产蛋白酶能力较高的菌株,经过初步鉴定该菌株属芽孢杆菌。通过对其产酶条件进行优化,结果显示该菌产酶最佳碳源为质量浓度15g/L的乳糖,最佳氮源为质量浓度20g/L的尿素,,最适发酵温度为35℃。莂关键词:菌种筛选;鉴定;蛋白酶;条件优化芀蛋白酶蛋白质中肽键水解的酶,是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶,也是目前世界上产销量最大的商业酶,其市场占有率约占整个商品酶销售量的60%,微生物蛋白酶从微生物中提取,不受资源、环境和空间的限制,具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性。目前,蛋白酶的研究仍注重于新品种的发掘,并通过分离筛选、发酵条件优化和诱变育种或构建基因工程菌等综合手段获得高产蛋白酶的优良菌株。我国的蛋白酶研究还存在如微生物资源开发不足,蛋白酶种类较少,酶制剂品种单一等问题。袈本论文从以下几方面对蛋白酶产生菌株进行较为系统的研究:从土壤中筛选出产蛋白酶能力较高菌株。对筛选出的菌株进行形态学的鉴定,将菌株初步确定到属。研究产蛋白酶菌株发酵产酶条件,对培养基成分和发酵条件进行优化,确定最佳培养基配方和发酵条件,进一步提高菌株的产酶活力。螄材料及方法::高压灭菌锅,恒温培养箱,超净工作台,电子分析天平,pH测量仪,水浴锅,微波炉,紫外光可见分光光度计,摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。:袅样品:取自忻州师范学院附近的土壤。袃试剂:无菌水(带玻璃珠)、100ug/ml酪氨酸溶液、、***乙酸、牛肉膏蛋白胨培养基、酪蛋白培养基、产蛋白酶发酵培养基肈二、操作步骤莈(一)配制所需培养基蚃按照以下配方配制所需的培养基羁牛肉膏蛋白胨培养基:,蛋白胨1g,,~,水100ml,,配制200mL蒈酪蛋白培养基:,酪素1g,,琼脂2g,定容于100ml袅产蛋白酶发酵培养基:玉米粉6g,豆粉4g,,,,定容于100ml蚄(二)、试管等实验器具,与121℃,用无菌水植被1:10土壤悬液。:10土壤悬液5mL,注入已灭过菌的试管中,将此试管放入75℃恒温水浴中热处理10min,以杀死非芽孢细菌及其他微生物。~200μL,涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养平板,后将平板倒置,于30~32℃下培养24~(三)筛选蚁1、从判定为芽孢杆菌的菌落处,分别挑取少许菌苔,接种于酪蛋白培养基,30~32℃下倒置培养24~48h。莅2、选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌,接入产蛋白酶发酵培养基30-32℃振荡培养48小时,将发酵液过滤或离心,取清夜检测蛋白酶活力进行复筛。薃(四):蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键,也能