文档介绍：TECONTECHNOLOGYCENTERNOVALIU昆虫细胞系的生长和维持细胞系简介:本手册包括Sf9、Sf21和H5昆虫细胞以及提供相关昆虫细胞生长和维持的一般信息。Sf9、Sf21和H5细胞系适于用杆状病毒或其他昆虫表达系统表达重组蛋白。运输与储存:运输:置于干冰上。储存和传代:置于液氮储存。收到细胞即可开始,详见14页。细胞系比较:下面的表格总结了Invitrogen细胞系一般特征。订购信息见下页。细胞倍增时间细胞外观初始培养基规则的带有颗粒球TNM-FHSf972h形。贴壁紧。不同大小带有颗粒TNM-FHSf2124h球形。贴壁紧。不同大小带有颗粒ExpressFiveSFMH518h球形。贴壁松。重要事项:Invitrogen(生命技术部分)通过RT-PCR证实H5细胞藏匿有内生的野田病毒。在一定条件下,H5产生野田病毒粒子。如此产生的病毒粒子未表现出对内原蛋白表达的不利的影响,或着在限制使用证书66号下已延伸和提供对H5细胞其它研究应用(见35页)。更多信息请联系技术支持。用途:仅供研究使用。禁止用于动物或人的疾病治疗和诊断。Sf9和Sf21细胞系:来源:Sf9(货号B825-01)和Sf21(货号B821-01)细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系,源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系,来源于秋蝇蠕虫(草地夜蛾)蛹的卵巢组织。特征:Sf9和Sf21有下列共同特征:易于形成单层和悬浮培养、适用无血清培养基。大小不同:Sf9细胞系克隆分离于IPLBSF21-AE(Sf21)。体积较小大小规则的使其易于形成单层和铺培养板。Sf21在大小和形成单层以及铺板规则上有一些不同。用途:两者都适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。如果你是第一次使用杆状病毒,你会发现Sf9细胞易于从斑块中分离。在一些结构上Sf21细胞可能比Sf9细胞表达蛋白量高。H5细胞系:来源:H5细胞系源于博伊斯汤普森研究所对植物的研究,伊萨卡、纽约和源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾。特性:此细胞系有如下特性:-1-TECONTECHNOLOGYCENTERNOVALIU●倍增时间小于24h;●适于贴壁培养,但易形成不整齐的单层,导致空斑鉴别困难;●适于悬浮培养和无血清培养;●提供5-10个折叠(针对选择的蛋白)分泌表达量比Sf9细胞高。用途:H5细胞表达重组病毒性能优越。也经常用于转染和空斑纯化;然而,如果重组体不是蓝色分离重组的空斑就比较困难。昆虫表达系统:大量从Invitrogen获得的表达系统在Sf9、Sf21或H5昆虫细胞中能便利的表达重组蛋白。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统适于用杆状病毒来表达重组蛋白,同时InsectSelect适于用无细胞溶解素的系统来表达蛋白。更多关于表达系统的信息请访问术服务。哪个细胞系最好用?推荐Sf9或Sf21细胞用于转染、纯化和增殖重组病毒。Sf9细胞大小一致,易于操作,能形成良好的单层细胞用于空斑实验。Sf9和Sf21细胞也能用于重组蛋白的表达,但是H5细胞系的生产量更高。推荐用H5细胞系来表达分泌型重组蛋白。其能在无血清培养基中培养,适应悬浮培养以及能生产大量的重组蛋白。注意:一般来说易于用一种细胞系来表达蛋白达到最优化的程序。一旦确定用一种细胞来表达重组蛋白,其它细胞系可以尝试优化表达水平。注意:当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时,注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂,因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。订购信息:见下表从Invitrogen获得冻存细胞信息细胞冻存货号:B825-01Sf91×107细胞/ml60%Grace's培养基,30%胎牛血清,10%DMSO货号:B821-01Sf211×107细胞/ml60%Grace's培养基,30%胎牛血清,10%DMSO货号:B855-023×106细胞/ml添加90mL/L谷氨酰***的H5ExpressFive®%%DMSO培养基昆虫细胞培养基:Sf9,Sf21和H5能在含血清或无血清培养基中生长(更多信息见12页培养基注意事项)。推荐如下培养基用于每个细胞系(见下表)。-2-TECONTECHNOLOGYCENTERNOVALIU细胞含血清培养基无血清培养基Sf9Grace's昆虫培养基Sf-900ⅡSFMSf21Grace's昆虫培养基Sf-900ⅡSFMH5Grace's昆虫培养基ExpressFive®SFM培养基订购信息:从Invitrogen获得的GIBCO®昆虫培养基用于培养Sf9,Sf21和H5昆虫细胞。订购信息见下表。产品数量货号非悬浮Grace's昆虫培养基500mL11595-030悬浮Grace's昆虫培养