文档介绍：来源:易生物实验浏览次数:444网友评论0条细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了5种方法。关键词:基因组细菌方法细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了5种方法。,12000rpm离心1min,丢去上清夜,收集菌体。(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,)混匀,置于37oC水浴1hr。***化钠溶液,混匀后于13000rpm离心15min。,用苯酚抽提2次,***仿抽提1次。,1/10体积醋酸钾(3M,),-20度保存1小时后,13000rpm离心15min,弃上清液,沉淀用70%乙醇洗2次;置于室温干燥后,溶于50ulTE溶液中,置4℃保存备用。2蛋白酶/SDS法制备先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftiasp.,第二天4000rpm离心10min收集菌体,用WashingTE(50mmol/LTris-,10mmol/)洗菌体2次,之后将菌体充分悬浮在5ml1×TE缓冲液中,、%SDS,轻轻混匀后50℃放置3h~5h,接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次,苯酚/***仿/异戊醇抽提一次,***仿抽提一次后,乙醇沉淀DNA,用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中,70%乙醇洗2次,干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。31)细菌培养:细菌接种于5ml液体培养基中,37℃摇床(300rpm)培养过液。2)细菌收集:,室温8000rpm离心5min,弃上清,沉淀重新悬浮于1mlTE()中(用ddH2O也行)。3)菌体裂解:加入6μl50mg/ml的溶菌酶,37℃作用2h。再加2mol/LNaCl50μl,10%SDS110μl,20mg/ml的蛋白酶K3μl,50℃作用3h或37℃过夜。(此时菌液应为透明粘稠液体)4)抽提:,加等体积的酚∶***仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5-10min。12000rpm离心10min。抽提两次。(上清很粘稠,吸取时应小心,最好枪头尖应剪去)5)沉淀:,混匀,室温放置10min。12000rpm离心10min。6)洗涤:沉淀用75%的乙醇洗涤。7)抽(凉)干后,溶于50μlddH2O中,取2-5μl电泳。作PCR模板用。-GENERAL1))Pelletcellsbycentrifugation,andresuspendin5ml50mMTris(),)Freezecellsuspensionat-20C4)(),10mg/mllysozymetofrozensuspension,,)%SD