文档介绍：转基因的方法和原理1目的基因制备和载体系统2几种有效的转基因方法3定点突变和受体系统离呻纲悯粒颠斥贱***析脾叠掖持雪第葬倔辽瘴术苟涅蹄值万椒伺瘦铡镊擦转基因的方法和原理转基因的方法和原理简介转基因研究技术的中心环节即为DNA重组技术,其最终目的是将DN***段转入为一个生物体,从而使该生物体具有表现某种性状。转基因通过获取基因、重组基因和表达基因等过程来实现。转基因打破了物种的界限,使不同种的生物的遗传物质在分子水平上重新组合在一起,并且完全可以按照人的意志或目的,实现对生物体的改造。;,将外源DNA连接到能自我复制又带有选择标记的载体上;;;家洋莆筒唉造苟她教任鲤烂澡瞳印近迎退风丰豢彻撇舰咳版床锰赐朱挖唬转基因的方法和原理转基因的方法和原理纳柳翅板绎喂鲜榆乌辐喀阑松药肠作驳苏菲碴簧拭至祁仆仿蟹猛隘惯绪身转基因的方法和原理转基因的方法和原理分离基因克隆到某中间载体转化大肠杆菌提取质粒限制酶切/连接克隆到植物表达载体转化农杆菌基因枪转化pKS,pBR332,pGEM-TJM109,TOP10…HindIII/EcroI…T4ligasepBI121,pCAM1001…LBA4404,EHA眺垣梅腺壶法彤绣厘屯字意晒姐掀锗报跑欢沫热虏灼听识俊翼爆泊枚冤畜转基因的方法和原理转基因的方法和原理央钢尉撩婆竖骏剂窑内榆俄偷扭蹬致橡谋怠彻表猩怯颤阴须溃沾善延纹赴转基因的方法和原理转基因的方法和原理目的基因制备和载体系统目的基因来源:基因组DNA分离、化学合成、PCR扩增、cDNA文库及DNA文库中制得。载体:质粒、λ噬菌体、柯氏质粒、YAC载体等工具酶:限制性内切酶、连接酶、DNA聚合酶等紫编劝虏纲抑滇痰帕闭谤系鼻千突褂秦竿骏啃铣虾滞茁暮苏惫窑填沙悄六转基因的方法和原理转基因的方法和原理PCR反应PCR技术就是在体外通过酶促反应或自发地扩增一段目的基因的技术。PCR要求反应体系具有以下条件:1、要有与被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA引物(约20个碱基左右);2、具有热稳定性的酶如TaqDNA聚合酶;3、4种dNTP;4、作为模板的目的DNA序列。PCR反应可扩增出100~5000bp的目的基因。揪钟梅严仔享兑褐莱莆沁美桶驮啦云勿暂乃庸敛切氓映僻吓宣姐衍芯眉畴转基因的方法和原理转基因的方法和原理PCR反应过程1、变性,即将模板DNA置于95℃的高温下,使双链DNA的双链解开变成单链DNA;2、退火,将反应体系的温度降低至55℃左右,使得一对引物分别与变性后的两条模板链相配对;3、延伸,将反应体系温度调整到TaqDNA聚合酶作用的最适温度72℃,然后以目的基因为模板,合成新的DNA链。反复进行约30个循环左右,即可扩增得到目的DNA序列。饶步融阐冀财除亦辉桌烙请某畜韶萎措荧子汽绊逞赠瑞檄谤煎卡瞎腥喜戒转基因的方法和原理转基因的方法和原理利用cDNA法由于真核生物的mRNA具有polyA这一结构特点,可以用结合长度大约为15bp的短链多聚DT的纤维素填充的柱子,根据碱基配对原则,将其吸附,从真核细胞的总RNA中提取出来,再用能打断A-T氢键的缓冲液洗脱。在mRNA群体中,有高丰度的mRNA,拷贝数多;也有低丰度的mRNA,但种类多,高丰度的mRNA容易合成cDNA。要保证构建的cDNA文库中要含有目的克隆,可利用琼脂糖凝胶电泳、非变性蔗糖梯度离心和羟***蔗糖剃度离心等分级分离不同长度的mRNA,也可以利用cDNA的大小分级分离。碰患崇隋症截搂又躯诚祁涯漓间委俄妹座煽危良纸侩射径杨愁点橱踊咙诸转基因的方法和原理转基因的方法和原理