文档介绍：胶体金免疫层析法快速检测流感病毒应用研究
作者:李月越陈杭薇王萍李兵郭文忠
【摘要】目的: 观察胶体金免疫层析(GICA)法检测流感病毒的效果. 方法: 用间接免疫荧光法(IFA)作为“金标准”,比较GICA与IFA两种方法对同一份标本甲型及乙型流感病毒检测效果,对GICA法诊断试验做出评价. 结果: 两种方法的检测结果有较好的一致性,GICA法检测流感病毒与IFA法检测结果之间差异无统计学意义(P>). 结论: GICA法操作简单、方便、快速,特异、灵敏,在临床流感病毒抗原的检测中具有较好的应用价值.
【关键词】胶体金免疫层析;快速检测;流感病毒A型;流感病毒B型
0引言
目前检测流感病毒的方法很多,但都存在各种不足,免疫金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,基于抗原抗体反应原理而产生的一种新型免疫标记技术. 其中免疫层析技术(GICA)因其具有检测速度快、敏感度高、特异性好、操作简便等特点,已在医学检验中广为应用[1]. 我们应用GICA法检测患者鼻咽部分泌物中的流感病毒A,B(influenza virus A,B,Flu A,B)抗原,并与间接免疫荧光法(IFA)做对照,对GICA法检测流感病毒方法作出科学、客观的评价,验证此方法在流感病毒检测中的可靠性,并探讨其应用价值.
1对象和方法
02/200801收治的各种急性呼吸道疾病患者532(男336,女196)例,年龄15~98(±)岁. 病种包括肺炎、上呼吸道感染、急性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、发热待查、肺癌、间质性肺病等. 对以上患者用细导管鼻咽部负压吸取法采集其鼻咽部分泌物作为本研究的实验样本. 胶体金免疫层析法试剂盒: Flu A型(国药准字S20063095),Flu B型(国药准字S20063135)均由北京阿斯可来生物工程有限公司提供,有效期内使用. IFA法所使用抗Flu A,B mAb由北京庄笛浩禾生物技术公司提供,有效期内使用. IFA法所使用二抗: 异硫氰酸荧光素(FITC)标记山羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术公司,有效期内使用.
h内进行,使用定制的玻璃试管中加入5 mL缓冲液(PBS),一端连接负压吸引器,一端连接细塑料导管,操作时将细导管经鼻腔插入7~8 cm到达鼻咽部,接通负压,旋转细导管并缓慢退出,吸取分泌物1~2 mL分泌物,后用滴管吹打数次(必要时加入抗粘液剂),然后将细胞悬液离心,弃上清,取沉淀液少许充分溶于裂解液中,用细管吸取裂解液,3~4滴于检测卡加样孔中,10~15 min后观察结果,在检测区和对照区各出现一条红色色带为阳性,仅在对照区出色一条红色色带为阴性.
,将用上述方法取得的同一患者的鼻咽部分泌物离心后弃上清液,取沉淀细胞涂片,风扇吹干后丙酮固定. 在制备好的细胞涂片上分别加入Flu A,B特异性单克隆抗体20
μL,置37℃恒温箱20 min,取出后用PBS液冲洗3遍,PB液洗1次,风干. 加入FITC标记的二抗,置37℃恒温箱20 min,洗片同上. 荧光显微镜下观察结果,病毒感染的鼻咽部纤毛柱状上皮细