实验十四 血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法).doc

文档介绍：:..蚄莄芇实验十四血清胆固醇测定蚂螈袄(胆固醇氧化酶法)蚇蒄蒅胆固醇的测定方法很多;通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法;前者可用血清直接测定,后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确,试剂无腐蚀性,而且因使用特异性酶,大大减少了血液中其它成分的干扰,目前已成为测定胆固醇的主要方法。蝿蒀羀【目的】,能进行血清胆固醇测定的操作。。膅蚃羁【原理】薁蚀肂血清中总胆固醇(TC)包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%,游离型占30%。胆固醇酯酶(CEH)先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸(FFA),胆固醇在胆固醇氧化酶(COD)的作用下氧化生成Δ4-胆甾烯***和过氧化氢。后者经过氧化物酶(POD)催化氢与4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反应,生成红色的醌亚***,其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比,在500nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下:薇莇螈薅蚁羇【器材】蚀莇蚂试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。蚂蒃衿【试剂】荿蒆袆酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。:≥200U/L膁蚆艿胆固醇氧化酶≥100U/L羅肁螆过氧化物酶≥3000U/L羀螆膃4--100,胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂,表面活性剂TritonX-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯,有利于胆固醇酯的水解。(200mg/dl)胆固醇标准液蒇羆袃精确称取胆固醇200mg溶于无水乙醇,移入100ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制)。袃羂蝿【操作】薀羆螀取试管3支,编号,按下操作。芄莀蚄表3-15酶法测定血清胆固醇操作步骤艿肆蚃加入物(ml)-薄羄螇-虿蒅膄胆固醇标准液羅蒂虿--蒀薅袄蒸馏水薂蚁螁-艿蚅蒇-,37℃水浴保温15分钟,在500nm波长处比色,以空白管调零,读取各管吸光度。蕿芈芈【计算】芃蚃螅莈莈膂【注意事项】—部分反应中的H2O2,降低显色反应,使结果偏低。但测定胆固醇,胆红素对酶法的干扰比化学法小。,故目前提倡采用胆固醇定值血清为标准。,但明显溶血可使结果增高,此时可用一个不加COD的空白管从结果中减去后纠正。,如维生素C、谷胱甘肽、***化物引起负偏差。袂【正常参考范围】~【临床意义】、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、胆管阻塞、甲状腺功能减退。