文档介绍：椹胚ィた。úAЩ涠承∈竽遗咛逋馀嘌后扩张率达到.%,,囊胚化率分别为.%和⑹褂肙两步细管法冷冻桑椹胚,.%和在衅胶鈒i┡,囊胚解冻移植后受体妊娠率和产仔率.%灾陀谏关键词:玻璃化冷冻,细管法,ǎi┡吆湍遗撸∈.%,两者间无显著差异。Ⅱ
。譼咄,.%.ィ.%,.%,甒.%,.%.%.畇/.∞.甌.%胐.%瑆豼.%...%瑃
.%ǎ峡..%,.呦...%.畂瓸簐在,竐砒,.%..%,.%ァ..%.%.幻.%.%.%甌孵.%瑃,,
符号说明缩略词二甲基亚砜国际单位摩尔杜氏磷酸盐缓冲液丙二醇胎牛血清促黄体素孕马血清促性腺激素人绒毛膜促性腺激素7攀嚼煜腹含%聚蔗糖和崽:乙二醇:胎牛血清:英文全称中文甘油聚乙烯吡咯烷酮促卵泡素聚乙二醇乙二醇:乙二醇:胎牛血清:簂:’%.￡
导师签名:刎锄/崔文崔历年乱迫论文独创性声明关于论文使用授权的声明年翵日年隆蝗本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名本人完全了解农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:
第一部分文献综述咛ゲAЩ涠潮4嬖玻璃化侵咐梦锢硌г斫ǜ吲ǘ鹊目苟潮;ぜ良彼俳滴潞螅液态转化为外形类似玻璃状的稳定而透明的非晶体化固体状态【。玻璃化的固体保留了液体正常的分子和离子分布,可以视为一种无序粘稠的超冷液体,因而避免了细胞内形成冰晶而对细胞产生伤害。等率先将玻璃化冷冻方法用于鼠胚胎的冷冻保存,用作为渗透性抗冻保护剂,添加鳳头巧透性抗冻保护剂剂乙二醇对小鼠赴咛ソ辛死涠潮4鎝V螅AЩ涠潮存得到不断改进,已成为冷冻保存研究的新热点,出现了许多关于不同种类哺乳动物的不同时期胚胎用各种不同玻璃化溶液冷冻保存的研究报道。经,琒等等,等,琀等,等蚈等的改进,玻璃化冷冻已成功应用于牛、绵羊、山羊、兔、大鼠、马、猪和人等哺乳动物胚胎的冷冻卜W苤AЩ涠撤操作简单、速度快,胚胎解冻后体内外发育率和重复率较高,不需要昂贵的自动控温仪,比慢速冷冻法有无可比拟的优点。胚胎低温冷冻保存实际上是一个脱水过程,冷冻保存最关键的是设法减少细胞内冰晶所致的损伤。标本降到一定温度时,首先在细胞外液形成冰晶,而细胞内液尚未形成冰晶,处于超冷状态。随着细胞外液冰晶逐渐增大,细胞外液的渗透压升高,具有较高的化学能。如果冷冻速度很慢,细胞膜两侧的渗透压差和化学能差导致细胞内水分跨膜向细胞外渗透引起细胞内进行性脱水,因此细胞内不能形成冰晶。相反,如果冷冻速度过快,细胞内水分不能及时渗出,而在细胞内形成冰晶,胞浆内冰晶过大会破坏细胞器,刺破细胞膜,导致细胞死亡。通过冻前在稀释液中加入~定浓度的抗冻保护剂,让细胞在保护剂中平衡并适当脱水,可将损伤降到最低限度。胚胎在冷冻过程中,ùτ诠渥刺陌什芤盒в拖胞内外化学势差异,导致水分在胞内和胞外冻结,这智榭鏊加攀贫韵赴婊钣为重要。,过冷胞质就形成冰晶,胚胎在冷冻过程和解冻过程中两次易形成冰晶的危险温区℃、..【,所以采用适当的冷冻方法和低温保护剂,使胚胎安全通过危险区很重要。将胚胎在冷冻前进行处理,向保存液中加入保护
AЩ芤撼S玫募咐嗫苟潮;ぜ渗透性保护剂.,;嗍勰等,I感钥苟潮;ぜ涟ū肌⒍谆琼俊⒈,可以改变细胞膜渗透性和溶液渗透性,防止溶液效应和渗透压差异,减少降温和复温过程中冰晶的形成。玻璃化冷冻保存胚胎时,其高浓度的渗透性保护剂组成的玻璃化液是一种粘稠的玻璃态物质,低温时它不结晶就可固化。胚胎在这种溶液中脱水一定程度,可引起内源性大分子和已渗入的保护剂浓缩,从而使细胞在急剧降温过程中得以保护。研究者普遍认为,在某些冷冻和解冻过程中形成的胞内冰晶是损害胚胎细胞恢复和存活的最致命因素‘棚。玻璃化冷冻作为慢速冷冻的替代技术,使用更高浓度的抗冻保护剂,并且降温速率高达痭陨希梢苑乐拱诒У男纬伞2AЩ涠晨墒箍苟巢ㄐ纬梢恢掷嗨乒烫混合物,大大简化和缩短了冷冻保存的程序,并且不需要昂贵的仪器【捌∞籚。玻璃化冷冻同样适用于牛体外成熟卵母细胞的冷冻闯墒斓腉诼涯赶赴.,