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RNAlater使用方法.doc

上传人:fangjinyan2017001 2019/6/20 文件大小:19 KB

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RNAlater使用方法.doc

文档介绍

文档介绍:RNAlater(以下内容源于Qiagen公司的产品说明书,仅供参考)    RNAlater 是一种液态的,无毒的组织保存试剂。它能迅速稳定组织,保护非冷冻细胞RNA 于原位。获得组织块后,迅速浸泡在RNAlater 中保存,而不会引起RNA 的降解,这样可以不必马上处理样品或将样品冷冻在液氮之中以备以后处理。RNAlater 应保存在室温下,保质期6 个月。如放置在4℃条件下则会引起沉淀,此时需加热到37℃才可澄清。RNAlater可广泛应用于多种脊椎动物样品。包括脑、心、肾、脾、肝、睾丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺。RNAlater 对大肠杆菌、果蝇、组织培养细胞、全血细胞和一些植物也有效。RNAlater 能否与RNA 提取试剂盒兼容?RNAlater 可与大多数RNA 提取方法相协调。特别是TRI Reagent., RNAwiz, TōTALLY RNA,RNAqueous, and Poly(A)Pure。  2. 如何使用RNAlater  RNAlater 只能用于新鲜组织,在浸入RNAlater 之前不能冷冻组织。简单切碎组织样品,(半个黄豆粒大小), 然后将组织碎块放入到5 倍体积的RNAlater 中保存。动物组织RNAlater 不会溶解或破坏组织样品的结构。如果需要的话,仍可将已经平衡在RNAlater 溶液中的组织取出并分割成更小的块再重新放入到RNAlater 中。小器官如鼠肝、肾和脾可以完整地保存在RNAlater 中。  植物组织 许多植物组织可以简单浸泡在5 倍体积的RNAlater 中保存。具有自然屏障防止扩散的植物如蜡表皮的叶组织可能需要先破坏其屏障,以允许RNAlater 进入组织。  组织培养细胞 沉淀细胞,用PBS 洗一次,再用少量的PBS 悬浮细胞,然后加5~10 倍体积的RNAlater 保存。  白细胞  如果将白细胞从红细胞和血清中分离出来,并按组织培养细胞一样处理后,白细胞便能有效地保存在RNAlater 中。不要将全血、血浆或血清中的RNA 保存在RNAlater 中,因为它们蛋白含量过高,与RNAlater 混合后易形成不溶的沉淀。  细菌  RNAlater 是抑菌的,虽然细菌在RNAlater 中不能生长,但细胞仍保持其完整性。大肠杆菌保存在RNAlater 中4℃条件下1 个月仍很完整,产生不降解的RNA。  3. RNAlater 中样品的保存  保存于-80℃建议用于批量保存。将样品在4℃条件下孵育过夜,然后从RNAlater 溶液中取出样品保存于-80℃。对于组织培养细胞,不必移去RNAlater,只需简单冻存整个溶液。实验证明,细胞在-80℃条件下冻存于RNAlater 溶液中并未出现溶解。样品可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA的质和量都不会受到影响。  保存于-20℃  建议用于批量保存。将样品在4℃条件下孵育过夜,然后转移到-20℃。样品在-20℃条件下不会冻结,但在存贮缓冲液中会有结晶形成,这并不影响随后的RNA 提取。样品可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA 的质和量都不会受到影响。  保存于4℃  厂家认为,目前尚无证据证明样品存于4℃ 1 个月内会出现RNA 降解。如果没有冰箱:将样品放在尽可能冷的环境中。如果周围温度超过