文档介绍：中国农业科学 2012,45(10):2058-2066
Scientia Agricultura Sinica doi: .0578-
犬白细胞介素-7 基因对犬细小病毒 DNA 疫苗的免疫增强作用
孙岩 1,仲飞 1,李秀锦 2,王幸兴 1,王璐 1,贾启恒 1,韩冬梅 1,李振 1,张峰 1,潘红丽 1
(1 河北农业大学动物医学院基础兽医部/农业部动物疫病病原生物学华北区观测实验站,河北保定 071001;2 燕山大学环境与化学工程学院
生物工程系,河北秦皇岛 066004)
摘要:【目的】白介素-7 是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进 B 细胞、T 细胞的形成和发育,在协
同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒 VP2 DNA 疫苗,在小鼠体内分析
了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用 RT-PCR 方法从犬脾淋巴细胞中扩增 cIL-7 基因,然后
将 cIL-7 基因插入到真核表达载体 中,分别构建成与 Myc/His 标签融合和非融合的 cIL-7 真核分泌型
表达载体 pcDNA-cIL7/MH 和 pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将 pcDNA-cIL7/MH 质粒转染 HEK 293T 细胞使其进行瞬时
表达,以 Western-blot 检测构建的表达载体能否介导 cIL-7 基因在真核细胞中进行分泌表达。用已构建的 VP2 表
达载体 pcDNA-CD5-VP2 与 pcDNA-cIL7 载体共免疫小鼠,并设 pcDNA-CD5-VP2 单免疫小鼠和 pcDNA-cIL7 单免疫小
鼠作为对照。免疫后通过 ELISA 方法检测抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验和 ELISA 方法分别检测免疫后 35 d
小鼠脾脏淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素的表达水平。【结果】本试验扩增的 cIL-7 基因序列与 GenBank 中犬的序
列完全一致。构建的表达载体能够介导 cIL-7 基因在 HEK293T 细胞中进行分泌表达。动物免疫试验结果显示,cIL-7
与 VP2 共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价分别极显著和显著高于 VP2 单免疫组(P< 和 P<);
共免疫组小鼠淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平也显著高于 VP2 单免疫组(P<)。【结论】cIL-7 基因
可增强小鼠对 VP2 DNA 疫苗的免疫应答反应。
关键词:犬 IL-7;细小病毒;VP2 基因;DNA 疫苗
Immune Enhancing Effects of Canine Interleukin-7 Gene
on Canine Parvovirus DNA ine
SUN Yan1, ZHONG Fei1, LI Xiu-jin2, WANG Xing-xing1, WANG Lu1, JIA Qi-heng1, HAN Dong-mei1,
LI Zhen1, ZHANG Feng1,PAN Hong-li1
(1Department of Basic Veterina