文档介绍：中国修复重建外科杂志2010年2月第24卷第2期·143·
人脱细胞羊膜复合脂肪源性干细胞修复大鼠
全层皮肤缺损的实验研究
鞠晓军 1 潘锋 1 柏树令 1 田晓红 2 佟浩 1 王军 1
【摘 要】 目的 人脱细胞羊膜(human acellular amniotic membrane,HAAM)含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素
和板层体等多种成分,这些成分能为细胞增殖、分化提供丰富营养。研究 HAAM 与脂肪源性干细胞(adipose-derived stem
cells,ADSCs)的生物相容性,探讨 HAAM 复合 ADSCs 构建真皮替代物修复全层皮肤缺损的可能性。 方法 取健康
4  月龄 SD 大鼠 30 只,雌雄不限,体重 250 ~ 300 g,于腹股沟处获取脂肪行 ADSCs 体外分离、培养和传代;取第 3 代细胞
行 HE 染色及 CD44、CD49d、CD34 免疫细胞化学染色鉴定。应用物理和酶消化法处理自愿捐赠的人羊膜获得 HAAM,
行 HE 染色观察细胞是否脱除干净,扫描电镜观察 HAAM 结构特征。将第 3 代 ADSCs 以 2 × 105 个/cm2 密度接种于
HAAM 上皮面,体外共培养 1 ~ 5 d 后分别行扫描电镜和 MTT 检测,不加材料组设为对照组。将大鼠随机分为 3 组,每
组 10 只,建立背部直径为 2 cm 的全层皮肤缺损模型。A 组创面植入复合 ADSCs 的 HAAM,B 组植入单纯 HAAM,C 组
常规包扎。术后行大体观察,于术后 1、2、4 周计算创面愈合率,并取创面皮肤行 HE 染色和细胞角蛋白 19(cytokeratin
19,CK19)免疫组织化学染色观察。 结果 HE 染色示第 3 代 ADSCs 呈梭形,胞核为椭圆形,位于细胞中央;免疫细胞
化学染色示第 3 代 ADSCs 表达 CD44 和 CD49d,不表达 CD34。HAAM 行 HE 染色未见细胞残留;扫描电镜下见 HAAM
两面具有不同的三维结构,上皮面为较致密的网状纤维;基质面为较稀疏的胶原纤维,未见纤维发生融合、断裂和降解。
ADSCs-HAAM 复合培养 3 d 后扫描电镜下可见细胞生长状态良好,胞体肥大呈梭形隆起,胞膜外绒毛致密略有弯曲,胞体
下方形成丰富的伪足牢固黏附于 HAAM 上;培养 1 ~ 5 d,MTT 检测示实验组和对照组吸光度值比较差异无统计学意义
(P > )。移植术后 1、2、4 周,A 组创面愈合率均高于 B、C 组,B 组高于 C 组,差异均有统计学意义(P < )。HE
染色示 A 组创面愈合速度快于 B、C 组;A 组 CK19 表达亦明显高于 B、C 组。 结论 HAAM 复合 ADSCs 构建真皮替
代物对大鼠全层皮肤损具有良好的促愈合作用。
【关键词】 组织工程皮肤 人脱细胞羊膜 脂肪源性干细胞 皮肤缺损 创面愈合 大鼠
中图分类号: 文献标志码:A
AN EXPERIMENTAL STUDY ON REPAIRING FULL-THICKNESS SKIN WOUND BY HUMAN ACELLULAR