文档介绍：山西医科大学
硕士学位论文
Fasudil对EAE小鼠脊髓内细胞Rock-Ⅱ表达的影响
姓名:李雁翔
申请学位级别:硕士
专业:神经病学
指导教师:马存根
2011-05-27
山西医科大学硕士学位论文
摘要

目的:Rho/Rho 激酶(Rock)信号途径是机体中普遍存在的信号转导通路,参与调控细
胞的增殖、粘附、移行等,被认为是控制细胞行为的上游信号分子。近来研究发现许多神
经病理状态均有 Rock 的激活,而应用 Rock 抑制剂可改善临床症状和病理状况。本实验应
用 Rho 激酶抑制剂 Fasudil 治疗 C57BL/6 小鼠 EAE,观察其临床疗效和潜在的免疫学机制,
目的在于探讨 EAE 的发病机制和应用 Fasudil 治疗 EAE 的作用机制,为 EAE 和 MS 的免
疫病理机制提供新的理论支持,也为今后临床应用 Fasudil 辅助治疗 MS S 自身免疫
性疾病提供实验依据。
方法:雌性 C57BL/6 小鼠随机分为 EAE 组 20 只,Fasudil 干预组 20 只,佐剂组 20 只。
EAE 和 Fasudil 干预组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 35-55(MOG35-55)进行免疫,建立 EAE
模型,佐剂组以等量生理盐水代替 MOG35-55 作为 EAE 组的对照。Fasudil 干预组于免疫后
第 7 天腹腔注射 Fasudil(50mg/kg/d),连续治疗 14 天。EAE 组和佐剂组给以等量生理盐
水作为对照。免疫后隔天观察各组动物体重变化和发病情况,并按国际通用标准评定临床
症状。在免疫后 4 周处死动物,取小鼠脊髓腰膨大处,行 HE 染色、Luxol Fast Blue 染色
及间接免疫荧光染色,观察各组小鼠病理变化及 Rock-Ⅱ的表达情况。实验数据采用
软件进行分析。
结果:
MOG35-55 多肽成功地诱导了 C57BL/6 小鼠 EAE 模型。EAE 组发病率 100%(n
=20),平均起病时间为 ± 天,高峰期平均症状评分 ±,高峰期平均体重
±。在发病后第 12 天开始相继出现明显的临床症状,发病轻重不一,首先表现为
进食减少,活动量减少,皮毛不光滑,体重减轻,尾部无力下垂,随病情加重出现一侧后
肢瘫痪,进一步发展为双侧后肢瘫痪,不能自主翻身,严重者伴有前肢瘫痪,最高评分达
到 4 分。Fasudil 干预组发病率 35%(n=20),较 EAE 组降低;平均起病时间 ±
天,较 EAE 组明显延迟(P<);高峰期平均症状评分 ±,较 EAE 组降低(P<);
高峰期平均体重 ±,与 EAE 组相比差异显著(P<)。这 4 项临床指标比较,
Fasudil 干预组与 EAE 组均有统计学差异。佐剂组未见发病,体重持续增加。
染色结果显示,EAE 组小鼠出现明显炎性细胞浸润, Fasudil 干预组和佐剂组则炎
性浸润较轻,EAE 组、Fasudil 干预组和佐剂组 Okuda 炎性细胞浸润评分呈明显差异。EAE
组炎性细胞浸润评分 ±,Fasudil 干预组 ±,佐剂组 ±。EAE 组和
Fasudil 干预组、EAE 组和佐剂组比较均有统计学意义(P<)。Luxol Fast Blue 染色显示,
EAE 组髓鞘脱失较 Fasudil 干预组和佐剂组更明显,且与病情的严重程度呈正相关。
3. Rock-Ⅱ在 EAE 组、Fasudil 干预组和佐剂组脊髓中均有表达,且表达情况与小鼠的
病情轻重程度和临床评分相一致,在 EAE 组血管内皮细胞明显表达。观察同一视野脊髓内
Rock-Ⅱ阳性细胞的数量,EAE 组小鼠为 ±,Fasudil 干预组 ±,佐剂组为
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±,EAE 组和 Fasudil 干预组、EAE 组和佐剂组相比较有统计学差异(P<)。
结果表明 Fasudil 干预组 Rock-Ⅱ的表达明显低于 EAE 组。
结论:
MOG35-55 抗原乳剂免疫 C57BL/6 小鼠,可成功建立 EAE 模型。
信号通路的激活与 EAE 发病有关。
抑制剂——Fasudil 能够降低 EAE 的发病率,缓解 EAE 临床症状,减轻炎性细
胞的浸润和髓鞘脱失。
4. Roc