文档介绍：液相色谱仪和色谱柱故障排除
故障排除
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发现问题
定位问题
纠正问题
防止问题的再发生
主要规则
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故障特征
1. 色谱峰展宽
2. 压力升高
螺丝、金属箍、毛细管
相应的对策
1. 用配套的螺丝、金属箍和毛细管
2. 连接进样器和色谱柱之间的管道
(柱外死体积)应尽可能地短
螺丝、金属箍和毛细管故障
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死体积
连接螺丝包括一个螺母和一个套在毛细管上的金属箍;它们必须和完全匹配
当完全匹配时,毛细管的顶端将和仪器或柱子的端口恰好吻合,而不至于形成死体积
死体积会导致出现肩峰和双重峰
注意: 不同生产厂家的螺丝和金属箍是不能通用的。
螺丝、金属箍、毛细管
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毛细管
1. 从泵到检测器所有毛细连接中,毛细管的内径应逐渐减小。
(如泵- mm的毛细管;进样器-柱子以及柱子-检测器连接
mm的毛细管)
3. 大内径的毛细管导致宽峰
4. 太长的管子导致峰的分辨率差,特别是换用微径柱时
2. 在使用微径柱(3 mm或2 mm)或梯度解吸时,选择合适内径和合适长度的毛细管尤为重要
注意: 使用短的和内径小的毛细管可以将和毛细管有关的柱外体积
效应降到最低
螺丝、金属箍、毛细管
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流动相的准备
1. 使用色谱纯的溶剂和优级纯的试剂
2. 用S& µm 的滤膜将所用的溶剂和缓冲溶液过滤
3. 使用HPLC级(或梯度级)的溶剂(如MERCK的溶剂事先都经过过滤)
4. 使用醋酸盐缓冲溶液比使用磷酸盐缓冲溶液要好,但应注意醋酸盐缓冲液在近紫外区的吸收
5. 使用酸或碱准备缓冲溶液要比使用盐好
6. %的叠氮钠溶液以防止流动相长菌
溶剂
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流动相脱气
使用不脱气或脱气不完全的流动相会导致形成气泡、泵性能不稳定、检测器噪音高以及其它检测器故障
注意: 1. 加热是流动相脱气的最好方
法,但不方便
2. 氦气脱气也很方便,仅需几
分钟就可以完成
3. 真空过滤脱气效果较差,但
很方便,也很经济,不失为
一常规办法
溶剂
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溶剂纯度的影响
溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”,特别是梯度解吸时
注意: 只能使用色谱级的溶剂!
不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液
溶剂
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溶剂混合产生的问题
流动相中所使用的不同溶剂必须互溶
注意: 过高浓度的磷酸盐缓冲溶液可能会在有机溶剂中析出
流动相中溶剂不互溶会导致:
1. 基线漂移,
2. 保留时间的重现性差,
3. 出现肩峰和“鬼峰”的问题.
溶剂
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样品的溶解
样品应该溶解于流动相中,如果样品在流动相中的溶解性实在太差,则应将进样体积降到很低(如1 µl)
选用不合适的溶剂溶解样品可能会导致
保留时间的重现性差,肩峰、双重峰和
“鬼峰”
溶剂
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