文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
阿司匹林对脂多糖诱导帕金森病模型多巴胺能神经元保护作用
及其机制的实验研究
姓名:王芳
申请学位级别:博士
专业:神经病学
指导教师:孙圣刚
2011-05-19
华中科技大学博士学位论文
阿司匹林对脂多糖诱导帕金森病模型
多巴胺能神经元保护作用及其机制的
实验研究
华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科
博士研究生王芳
导师孙圣刚教授
中文摘要
第一部分
阿司匹林对脂多糖诱导帕金森病模型多巴胺神经元的保护作用
目的:探讨阿司匹林(aspirin, ASA)对脂多糖(haride, LPS) 诱导的帕金森
病细胞模型中多巴胺能神经元损伤是否具有保护作用,并初步探讨其可能的作用机
制。
方法:采用胚胎大鼠中脑原代细胞培养法,分别建立原代中脑神经元-胶质细胞,神
经元细胞,神经元-星型胶质细胞和神经元-小胶质细胞培养体系。在原代中脑神经元-
胶质细胞中给予不同浓度 ASA (、、和 1mmol/L) 预处理 1h 后,给予脂多糖
(10ng/ml),培养七天后,免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目,
western-blot 法检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase, TH)在蛋白水平的表达;在原
代中脑神经元细胞,神经元-星型胶质细胞和神经元-小胶质细胞体系中 ASA
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(1mmol/L)预处理 1h 后,LPS (10ng/ml) 作用七天,采用免疫细胞化学法检测空白
对照组,ASA 组,ASA+LPS 组和 LPS 组中酪氨酸羟化酶阳性神经元数目。
结果:在 LPS 诱导的中脑原代多巴胺能神经元损伤中,LPS 组中 TH 阳性细胞数明显
低于 ASA 预处理组和空白对照组(P<),并且 LPS 组中 TH 阳性神经元突起与其
他组相比明显减少甚至消失。ASA(~1mmol/L)预处理能显著改变这一变化,且
呈剂量依赖性;在原代中脑神经元细胞培养体系中,空白对照组和各实验组中 TH 阳
性细胞数并无显著性差异(P>);在原代神经元-星型胶质细胞系中,LPS 组与对
照组相比,TH 阳性细胞明显减少(P<),但是 LPS+ASA 组与 LPS 组相比较,TH
阳性细胞数无显著性差异(P>);在原代神经元-小胶质细胞培养体系中,与空白
对照组相比,LPS 作用后可显著减少 TH 阳性细胞数(P<),并且 ASA 预处理后
可显著减轻 LPS 对多巴胺能神经的损伤作用(P<),提示 ASA 对多巴胺能神经
元的保护作用是通过小胶质细胞介导的。
结论:ASA 对脂多糖诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具有保护作用,并且此作用是
由小胶质细胞介导的。
关键词:帕金森病小胶质细胞阿司匹林脂多糖
第二部分
阿司匹林对脂多糖诱导的帕金森病细胞模型中炎症因子的调节作用
目的:本实验采用胚胎大鼠中脑原代神经元-胶质细胞混合培养体系,应用脂多糖建
立多巴胺能神经元损伤的炎症机制模型,研究 ASA 对炎症因子表达的影响,探讨其
神经保护机制。
方法:在原代培养中脑神经元-胶质细胞中,加入不同浓度 ASA(~1mmol/L)预
处理 1h 后,给予 LPS (10ng/ml) 共培养七天后,检测促炎症因子,包括肿瘤坏死因子
-α(TNF-α)(ELISA kit),一氧化氮(NO)(Griess 法),超氧化物(WST-1 法),和胞
内活性氧(reactive oxygen species, ROS)(DCFH-DA);抗炎症因子,包括 IL-10(ELISA
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kit)和 TGF-β1(ELISA kit)的表达变化。
结果:、、1mmol/L ASA+LPS 组中 NO,TNF-α,超氧化物和胞内 ROS 的浓
度均较 LPS 组明显降低(P<);同时,、、1mmol/L ASA+LPS 组中 IL-10
和 TGF-β1 的浓度与 LPS 组相比较均有显著增高(P<)。
结论:ASA 能够抑制 LPS 诱导的 PD 细胞模型中促炎症因子表达和促进抗炎症因子
生成,这可能是 ASA 保护多巴胺能神经元的机制之一。
关键词:阿司匹林;脂多糖;神经保护;活性氧;NO; TNF-α;IL-10; TGF-β1
第三部分
阿司匹林对脂多糖诱导的帕金森病模型中 NADPH 氧化酶的调节作用
目的:本实验主要研究