文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用研究
姓名:黄晓菲
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学
指导教师:杨成
2011-05
华中科技大学硕士学位论文
骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖
和成骨分化的作用研究
中文摘要
目的:探讨骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞(DPSCs)增殖和成骨分化的影响,并对
PI3K/Akt 通路在其中的作用进行初步研究。
方法:
1、分离培养大鼠 DPSCs 并进行鉴定:采用组织块消化法分离获得大鼠牙髓细胞,
克隆化分离培养大鼠 DPSCs,并采用免疫组织化学方法鉴定其细胞表型。
2、检测骨碎补总黄酮对大鼠 DPSCs 增殖和成骨分化的作用:实验组用骨碎补总
黄酮浓度分别为 g/L、 g/L 和 g/L 的成骨诱导培养基进行培养,对照组不
加入骨碎补总黄酮,仅以成骨诱导培养基为细胞培养体系。分别在诱导培养后第 3、5、
7 和第 9 天用 MTT 法检测各组细胞的增殖;培养后第 9 天检测各组细胞碱性磷酸酶
(ALP)水平;第 21 天茜素红染色法检测钙结节形成情况。
3、检测 PI3K/Akt 通路在骨碎补总黄酮对大鼠 DPSCs 增殖及成骨分化作用过程中
的活化情况:诱导培养后第 9 天采用 Western Blot 法检测以上各组细胞 pAkt 的表达。
结果:
1、分离出的大鼠牙髓细胞体外生长良好,形态多为成纤维细胞样,少量细胞形
态不规则;克隆化分离培养出的 DPSCs 增殖较快,呈集落样生长,细胞排列紧密,
随着培养时间的延长,细胞形态逐渐伸展为长梭型;免疫组化结果显示大鼠 DPSCs
阳性表达 CD44 及 CD29,而 CD34 呈阴性表达。
2、经骨碎补总黄酮浓度分别为 g/L、 g/L 及 g/L 的诱导培养基作用后,
从时间上看,在各检测时间点,各实验组 OD490 与对照组相比均增加(P<),且
g/L 组较 g/L 组的 OD490 也增加(P<),但 g/L 组较 g/L 组 OD490
增加没有显著性差异(P﹥);从浓度上看,各实验组第 5、7、9 天较第 3 天的 OD490
均增加(P<),且各实验组 OD490 时间依赖性增加也有显著性(P<)。各实
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验组细胞 ALP 活性均高于对照组(P<),且在骨碎补总黄酮浓度为 g/L、
g/L 及 g/L 时的 OD410 浓度依赖性增高也有显著性(P<);实验组钙化能力较
对照组增强(P<),且有浓度依赖性(P<)。
3、pAkt 的蛋白相对表达量随骨碎补总黄酮浓度的增加而升高(P<)。
结论:骨碎补总黄酮对大鼠 DPSCs 增殖及成骨分化具有促进作用,表现出浓度和时
间依赖性,且该作用可能是依赖 PI3K/Akt 通路所介导的。
关键词:牙髓干细胞;骨碎补总黄酮;PI3K/Akt 通路;增殖;成骨分化
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Effects of total flavonoids of drynaria on proliferation and
osteogenic differentiation of rat dental pulp stem cells
Abstract
Objectives:To explore the effects of total flavonoids of drynaria on proliferation and
osteogenic differentiation of rat dental pulp stem cells (DPSCs), and to evaluate the
potential role of PI3K/Akt pathway in the aforementioned effects.
Methods:
1. Dental pulp cells were cultured by bined with enzyme digestion
technique. Single cell line of DPSC was isolated by limited dilution of cultured cells and
identified