文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
IBP(IRF-4结合蛋白)在人涎腺腺样囊性癌中表达及功能的实验
研究
姓名:熊剑
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学
指导教师:周继祥
2011-05
第三军医大学硕士学位论文

IBP(IRF-4 结合蛋白)在人涎腺腺样囊性癌中
表达及功能的实验研究

摘要

腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)是涎腺最常见的恶性肿瘤之一,常
好发于小涎腺。该肿瘤起病隐蔽,生长缓慢,侵袭性强,易复发、易早期转移,且对
常规的化疗、放疗等治疗措施不敏感,因其有沿着周围组织的神经血管潜行性生长的
特点,而确切定位神经受侵部位尚无客观手段,从而给临床手术完全切除肿瘤带来较
大困难。切除范围不足时,术后易复发;而盲目扩大切除,必然给患者带来不必要的
畸形和功能障碍。因而综合治疗效果和远期疗效均不理想。随着基因治疗的兴起,深
入研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,)的生物学特性,从基
因和蛋白水平来探讨的发生机制,寻找与的发生、发展和预后相关的生
物学标记成为国内外研究的热点,基因治疗也成为未来最具潜力的有效根治的
方法。
IBP(IRF-4 binding protein, IRF-4 结合蛋白)是一种主要表达于 T 淋巴细胞并具有
重要功能的蛋白质。它参与 TCR 信号刺激下 T 细胞免疫突触的形成;与 Th2 细胞的
分化密切相关;通过抑制 IRF-4 的转录因子活性调控介素 17 与介素 21 的产生,影响
Th17 细胞的功能;影响 MAPKs 与 NF-κB 参与 TLRs 传导通路;在维持免疫内环境
的稳定中发挥重要作用。IBP knockout 小鼠表现为自身免疫免疫性疾病的症状。另外,
IBP 具有 GEF(鸟苷酸交换因子)的作用,能够激活 Rho GTPase 家族的部分成员。以上
这些研究结果均提示 IBP 可以参与细胞骨架的重构、细胞极化、细胞间的信息传递等
多种重要的生理过程。近来有学者发现 IBP 在结肠癌及乳腺癌中高表达并起着重要的
作用。但 IBP 在中的表达及功能还未见报道。本课题首次以为研究对象,
对 IBP 在和正常涎腺中的表达及其可能的临床意义进行研究,并建立了稳定高
表达 IBP 的细胞株,通过体外试验证实 IBP 在中的功能及其可能的机制。
主要研究内容和结果:
一、IBP 在和正常涎腺中的表达及其临床意义的研究
1、利用 ACC2、ACCM 等 2 株细胞株通过 Western Blot 技术检测 IBP 的表
达情况;结果显示:IBP 在 ACC2、ACCM 细胞株中均阴性表达。
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2、收集了 27 例石蜡标本和 20 例正常涎腺组织标本,通过免疫组化染色
对 IBP 在临床样本中的表达情况进行分析,并将其与临床样本的其它病理学指标进行
统计学分析确定其临床意义;结果表明:27 例中仅 3 例 IBP 基因表达弱阳性,
20 例正常涎腺组织中则全部表达阳性,两组间存在显著性差异(P<)。而 IBP 的
表达与患者的年龄、性别及肿瘤部位均无明显的相关性(P>)。
二、IBP 在中的功能及其机制的研究
1、利用 IBP 阴性表达的 ACC2 细胞,通过质粒转染构建 IBP 过表达细胞模型;
通过 Western Blot 检测证实获取了稳定高表达 IBP 的 ACC2-C1/IBP 细胞株。
2、通过 MTT 法检测各组细胞增殖情况,确定 IBP 对细胞增殖的影响;结果表明:
IBP 抑制细胞的增殖。
3、通过平板克隆形成试验,检测 IBP 对 ACC2 细胞克隆形成能力的影响;结果
证实:IBP 能抑制细胞的克隆形成能力。
4、采用 Transwell 试验,将穿膜细胞进行染色计数分析各组细胞侵袭能力的变化,
明确 IBP 对细胞侵袭能力的影响;结果表明:IBP 有促进细胞侵袭的作用。
5、通过临床常用的治疗药物紫杉醇为诱导剂,观察 IBP 的表达对
细胞耐受紫杉醇杀伤能力的影响;结果提示:IBP 在一定程度上还具有紫杉醇抗药性。
6、利用微管蛋白 Tubulin 免疫荧光染色,观察 IBP 与微管的关系,并观察紫杉醇
作用前后微管的变化;结果表明:IBP 与微管有一定程度的共定位,并能促进微管的
解聚。
7、通过波形蛋白和角蛋白的免疫荧光染色,初步探讨了 IBP 与 EMT 的关系;初
步证实了 IBP 能够促进上皮间质转化的发