文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
IBP在口腔鳞癌中的表达及增殖作用研究
姓名:简从相
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学
指导教师:周继祥
2011-05
第三军医大学硕士学位论文
IBP 在口腔鳞癌中的表达及增殖作用研究

摘要

口腔鳞状细胞癌() 位居人类十大恶性肿瘤第六位,是全世界常见肿瘤之
一。目前,全世界每年有约五十万新增病例,并呈逐年升高的趋势,尽管手术治疗、
化疗和放疗技术都有所发展,但由于的病因及发病机制不甚清楚, 的 5
年生存率仅为 50%-70%。因此深入探讨发生发展的分子机制对口腔鳞癌的诊
断、治疗和预防具有重要的意义。在的发生发展过程中都发现了部分鸟苷酸交
换因子(GEF)以及 RhoGTP 酶分子的异常表达。而 RhoGTP 酶下游信号通路的激活
也与肿瘤细胞的增殖和转移相关。IBP 是新近发现的具有类似 GEF 分子的结构并能激
活部分 RhoGTP 酶的一个新分子,目前报道其在免疫系统中发挥着重要的功能。基因
芯片研究结果显示:在骨外粘液样软骨肉瘤与一般肉瘤的差异表达基因之中,IBP 是
5 个差异最显著的基因之一。近来有学者发现 IBP 高表达于结肠癌及乳腺癌中并发挥
重要作用。这些研究强烈提示:IBP 在的发生发展过程中可能具有重要的作用。
但 IBP 在中的表达及功能还未见报道。本研究首次检测了 IBP 在组织中
的表达及意义,建立了稳定高表达 IBP 的细胞株,并初步探讨 IBP 对增
殖的作用。
主要研究内容和结果
1. IBP在口腔鳞癌中的表达及意义
1) 采用兔抗人CK8单克隆抗体及鼠抗人IBP单克隆抗体,应用双重免疫荧光技术检
测IBP在人正常口腔粘膜组织,组织中的表达水平及表达模式。研究结果显示:
在人正常口腔粘膜组织中未检测到IBP表达,的胞浆中阳性表达。
2) 病人癌组织和6例口腔粘膜正常组织,采用本实验室制备的鼠抗
人IBP单克隆抗体,应用免疫组化技术进行检测。结果显示:中有36例IBP
呈阳性表达,而6例口腔正常粘膜组织中未见IBP表达。
3) 应用Fisher’s精确统计方法分析IBP的表达与患者性别,的大小,分化水平,
临床TNM分期,是否发生远处转移之间的关系,结果提示:大小、
临床TNM分期及是否发生远处转移呈正相关,而与其分化水平呈负相关,存在统计学差
异(p < )。
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2. IBP 对口腔鳞癌增殖作用研究
1) 选取口腔鳞癌细胞株 Tca8113;乳腺癌细胞株 MDA-MB-231;RNAi 下调 IBP
表达的乳腺癌细胞株 MDA-MB-231 /SR119-2;及相应对照细胞株 MDA-MB-231/con。
用 Western blotting 检测各组细胞的 IBP 表达。结果显示:Tca8113 中 IBP 呈阴性表达。
而 MDA-MB-231 /SR119-2 中 IBP 呈阳性表达且较 MDA-MB-231 及 MDA-MB-231/con
组低。
2) 利用 IBP 阴性表达的口腔鳞癌细胞株 Tca8113,通过质粒转染构建 IBP 过表达
模型。通过 Western blotting 检测证实获取了稳定高表达 IBP 的细胞株
(Tca8113/IBP)。
3) 通过 MTT 法检测各组细胞增殖情况的差异,判断 IBP 对 Tca8113 及
MDA-MB-231 细胞生长的影响。结果证实:上调 IBP 表达的 Tca8113/IBP 组细胞生长
速度明显快于 Tca8113/C1 及 Tca8113 组;而 RNAi 下调 IBP 表达的 MDA-MB-231 细
胞的生长速度明显变慢。
4) 利用克隆形成试验证实:上调 IBP 能促进克隆形成能力。
5) 通过流式细胞术检测上调 IBP 对 Tca8113 的细胞周期的影响。结果显示:IBP
能缩短细胞的 G1 期促进其进入 S 期。
6) 通过 Western blotting 检测各组细胞周期相关蛋白表达,初步探讨 IBP 对
细胞增殖能力影响的机制。Tca8113/IBP 组细胞 cyclin D1 的表达高于 Tca8113 和
Tca8113/C1 组;而 cyclin E 和 P27 Kip1 在各组细胞中的表达未见明显变化。
7) 通过裸鼠成瘤实验证实 IBP 在体内同样也能促进的增殖。
综上所述,本研究发现 IBP 高表达于部分组织,但在正常口腔粘膜中未检
测到表达。统计学分析显示:IBP 的表达与的肿瘤体积,分化程度,TNM