文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
邻苯二甲酸丁苄酯对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞类雌激素样作
用的影响
姓名:张娟
申请学位级别:硕士
专业:卫生毒理学
指导教师:李涛
2011-01
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
邻苯二甲酸丁苄酯对人神经母细胞瘤 SH-SY5Y
细胞类雌激素样作用的影响
硕士研究生:张娟
指导老师:李涛副教授
摘要
邻苯二甲酸丁苄酯(Butyl benzyl phthalate, BBP)是目前应用广泛的邻苯二甲
酸酯类(phthalate esters, PAEs)之一,具有内分泌干扰作用。BBP 作为增塑剂、
软化剂、载体及添加剂,广泛用于塑料、汽车、润滑剂、化妆品、服装、农药等
行业。在生产过程中,由于BBP 并未与这些PVC共价牢固结合,随着塑料的大量
使用、废弃,而使该化合物逐渐释放入环境中,对人群健康产生危害。人类BBP
暴露的最重要途径就是食品,主要来源是PVC 食品包装材料。
近年来,BBP 的毒性逐渐受到关注。据估计,成年人的BBP 暴露量为平均8
μg/kg/d,最高可达20 μg/kg/d,而婴儿和儿童的暴露大约是成人的3倍。另有研究发
现,Puerto Rico 大学的Ivelisse Colon 应用气质联用(GC/MS)技术测定了波多
黎各岛41 名性早熟女童与35 名发育正常女童的血液样品,发现性早熟女童血液
中BBP、DMP、DEP、DBP、DEHP 的浓度明显高于对照组,在排除其他因素的
干扰前提下,推测PAEs 可能与当地女童早熟有关。
众多学者研究认为,BBP 作为一类雌激素类物质,进入人体后,可与相应
的激素受体结合,干扰体内正常水平激素的维持,从而影响人的生长、发育和行
为。如人体长期、慢性接触 BBP,可导致内分泌紊乱、生殖机能失常等。BBP 还
可通过胎盘和授乳产生跨代影响。本室以往研究发现,母鼠妊娠期和哺乳期接触
BBP,F1 代大鼠脑组织CREST、BDNF、spinophilin mRNA 表达均降低,且对雄
性仔鼠学忆能力造成损害。
综上所述,BBP 的毒性作用不容忽视。以往对于BBP 的污染以及危害的研
究仍具有一定的局限性,因此有必要对其毒作用机制进行深入探讨。本研究以人
神经母细胞瘤(SH-SY5Y 细胞)为模型,研究BBP 对SH-SY5Y 细胞类雌激素
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样作用的影响,将为进一步了解BBP 的神经毒作用机制提供科学依据。
第一部分 BBP 对 SH-SY5Y 细胞毒性作用
一、BBP 对 SH-SY5Y 细胞活性的影响
目的:探讨 BBP 对 SH-SY5Y 细胞活性的影响。
K-8 法测定细胞活性。
结果:(1)确定染毒时间为 24 h,E2 染毒剂量为 μmol/L,雌激素受体拮
抗剂(ICI182,780)剂量为 1 μmol/L;(2)、 μmol/L 的 BBP 和 μmol/L
E2 对 SH-SY5Y 细胞存活率分别为 %、 %和 %,与对照组相
比细胞存活率明显升高,差异有统计学意义;30、300 μmol /L BBP 组 SH-SY5Y
细胞存活率明显降低,差异具有统计学意义;(3)BBP、E2 可促进 SH-SY5Y 细
胞增殖作用,而 ICI182,780 可逆转 BBP、E2 的细胞增值作用。
结论:低剂量与高剂量 BBP 对 SH-SY5Y 细胞产生不同的效应,BBP 的毒
性作用可能是雌激素受体(ER)介导的。
二、BBP 对SH-SY5Y 细胞凋亡的影响
目的:研究 BBP 对 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响,并初步探讨 BBP 诱导
SH-SY5Y 细胞凋亡的作用机制。
方法:流式细胞仪 PI-Annexin V 双染法测定细胞凋亡。
结果:(1)100、300 mol/L BBP 组 SH-SY5Y 细胞凋亡率明显升高,与对
照组比,差异均具有统计学意义(P <);(2)、 mol/L BBP 和 mol/L
E2 可显著降低 SH-SY5Y 细胞的早期凋亡率和总凋亡率,与对照组相比,差异均
具有统计学意义(P <);(3)ICI182,780 预处理可逆转 μmol/L BBP 和 E2 促
进 SH-SY5Y 细胞凋亡率的升高作用。
结论:低剂量 BBP 促进 SH-SY5Y 细胞增殖,细胞凋亡