文档介绍：报告编号:
合同编号:20091113009
科技查新报告
项目名称: 系列食源性病原菌 ICT 快速检测试剂盒
的研制与开发
委托人: 广东检验检疫技术中心
委托日期:2009 年 11 月 13 日
查新机构(盖章):广东省科学技术情报研究所
查新完成日期:年月日
中华人民共和国科学技术部
二ООО年制
中文: 系列食源性病原菌 ICT 快速检测试剂盒的研制与开发
查新项目名称
英文(国内外):
机构名称广东省科学技术情报研究所
查
通信地址广州市连新路 171 号科学馆大院内科技信息大楼九楼查新检索中心
新
邮政编码 510033 电子邮箱 ywb303@
机
负责人罗秀豪电话 020-83561171 传真 020-83560508
构
联系人余文斌电话 1 020-83561171-808 电话 2 020-83560462-808
一、查新目的
成果鉴定查新
二、查新项目的科学技术要点
本研究用大肠杆菌O157 和单增李斯特氏菌全菌体抗原多次免疫新西兰大白兔,制备抗大肠杆菌
O157 和抗单增李斯特氏菌多克隆抗体。用辛酸-硫酸胺法和Protein G亲和层析 2 种方法分别纯化
制备的多克隆抗体,结果表明两种方法纯化后抗体的纯度均达到 85%以上,但效价测定显示Protein
G法纯化后抗体的效价有一定程度下降,而辛酸-硫酸胺法纯化的抗体效价较好。因此,对两种菌体
多抗均采用辛酸-硫酸胺法进行纯化。根据试纸条的侧向流动和胶体金的示踪功能,结合免疫学原
理,分别建立并优化了检测大肠杆菌O157 和李斯特氏菌的双抗体夹心免疫胶体金方法。测定了胶体
金颗粒的最优化反应体系:胶体金颗粒的大小为 30nm;抗大肠杆菌O157 抗体与胶体金溶液结合的最
适标记pH值为 ,抗李斯特菌抗体的最适标记pH值为 ;标记抗大肠杆菌O157 抗体的最低用量
为 35μg/ml,实际工作中的最适标记量为 40μg/ml。标记李斯特菌抗体的最低用量为 40μg/ml,
实际工作中的最适标记量为 45μg/ml;大肠杆菌O157 检测条检测线抗体最佳包被浓度为 mg/ml,
金标抗的最佳稀释比例为 1:8。李斯特菌检测条检测线抗体最佳包被浓度为 2 mg/ml,金标抗的最
佳稀释比例为 1:6;质控线羊抗兔IgG最佳包被浓度为 mg/ml;确定检测线的包被位置为距NC
膜下缘 ,。用研制的大肠杆菌O157 和单增李斯特氏菌ICT
试剂盒对实验室保存的已鉴定 8 株O157、20株单增李斯特氏菌菌株进行检测,大肠杆菌O157 符合率
为 %,单增李斯特氏菌符合率为 90%,两种试剂条检测下限均为 105CFU/mL,显色时间为 3~5 分
钟。两种试剂条的特异性、重复性和敏感性较好,可应用于实际检测工作中。
三、查新点与查新要求
A、查新点:
O157 和单增李斯特氏菌菌体抗原免疫新西兰大白兔,成功制备了高效价的抗大肠
杆菌 O157 的多克隆抗体和抗单增李斯特氏菌