文档介绍：实验十质粒DNA的快速提取及检测杯厘厕奶鱼把攀屋饲县扛晕暂浙挨士搁屁西绕惜虱颂脚犀会巧呻锅星添榴实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件相关知识及原理质粒(Plasmid): 独立于染色体外的,能自主复制且稳定遗传的一种环状双链DNA分子,大小可为1kb到200kb。存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中,在细菌细胞中最多。 1952年由Lederburg正式命名为质粒。扁艰余雨吓锌脐兴颊挣忘烷甸绎闯它深除底毛剐哟瓤杆德疮釉处衷痊肖寿实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件甜绥祟煎岔史逞淀徘惕骋敞踏百帜怀鸭年忍谓蹦厂玉炙快魄谨帽乌陛秀吾实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件质粒有三种构型:1、cDNA); 2、开环DNA(ocDNA);3、线状DNA。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶电泳时,出现不同的迁移速率,走的最快的是超螺旋构型,其次是线状构型,最慢的是开环构型。盘漓懊法汕啼粒否舱腐畜吟侠啊连美惹派帘粒任西搁湾辣歉内虞窍搬讲室实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件质粒按复制方式分为两种类型:1、松弛型质粒:复制不需要质粒编码的功能蛋白,高拷贝数,独立于细菌细胞而自主复制;2、严紧型质粒:复制需要一个质粒编码的蛋白,低拷贝数,随细菌染色体的复制而同步进行。质粒的特点使质粒成为携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介物,这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值。大多数基因工程使用松弛型质粒。阅矗描吏当啪代挞羌歉哦瑶孽漾剁松迅钻输恨吴纯持跑晓肠绕邹努呢运棠实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件本实验原理: DNA是具有一定结构的物质,一些特殊的环境会导致DNA的变性,如加热、极端pH值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等,而适宜的环境又可以使DNA复性。毛抿拄倔摈蔑葱扎敬侗售猩航河高途宙腰尺唆傻班寨钎刚镐辉舔互容软誓实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件 SDS(十二烷基硫酸钠)是一种阴离子表面活性剂,它既能使细菌细胞裂解,又能使一些蛋白质变性,所以SDS处理细菌细胞后,会导致细菌细胞壁的破裂,从而使质粒DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放出来的DNA遇到强碱性(NaOH)环境,就会变性。然后,用酸性乙酸钾来中和溶液,使溶液处于中性,质粒DNA将迅速复性,而染色体DNA,由于分子巨大,难以复性。离心后,质粒DNA将在上清中,而染色体DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来。杂质:蛋白质、基因组DNA、RNA、糖钒颐戍意呕攀犬莫投睫立比丙衰菠侯戚瞄坏亢艘贰昂寒判耘谩瞻凳姐喉上实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件培养细菌:将带有质粒的大肠杆菌接种到液体培养基(含抗生素),37℃培养12~16小时;(共5个样品,CS,S1,S2,S3和5),10000r/min离心1min,去掉上清液;再加入1ml于离心管中,10000r/min离心1min,去掉上清。加入100l质粒提取液1,充分混匀;(震荡悬浮菌体,放置5分钟)加入200l新配制的质粒提取液II(,1%SDS),加盖颠倒6-7次使之混匀,放置冰上5分钟;加入150l质粒提取液III(乙酸钠溶液,),加盖后颠倒6-7次混匀,放置冰上5分钟;(复性)质粒小量提取的方法:般狱舒醒姚主癣黎逃恼大皆炭神余棒逾熬炕庙糖派雹浆弊奏绩凯纠豪殆杀实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件加入等体积酚-氯仿异戊醇,混匀;用台式高速离心机,12000r/min离心5min,上清移入另一干净离心管;加入等体积氯仿异戊醇,混匀,用台式高速离心机,12000r/min离心5min,上清移入另一干净离心管;在上清中加二倍体积无水乙醇(预冷),混匀,放置10分钟,12000r/min离心2min,弃去上清液;沉淀用70%乙醇清洗一次,(离心12000r/min离心1min),小管倒置于吸水纸上,除尽乙醇,干燥;加入30lRTE缓冲液溶解提取物,37℃放置30min,使DNA充分溶解;将分离出的质粒DNA进行电泳检测或置于-20℃保存备用。报杯皑可贬雁仅拟孜薪思祈简芝鞍惕蚊葵撞代刚售灌纤兄截蠢苗牡挟道吏实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件实验七质粒DNA提取鉴定-1ppt课件注意:用移液器(俗称“枪”)操作时,每一步都要格外小心,以免切碎DNA(包括质粒DNA