文档介绍：山西医科大学硕士学位论文
非小细胞肺癌患者外周血和肿瘤组织
表皮生长因子受体突变的研究
中文摘要
背景与目的:近年来,以吉非替尼和厄洛替尼为代表的表皮生长因子受体(Epidermal
growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors , TKIs)已成
功用于临床非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗,它以显著的客观疗
效和极小的副作用成为特异性抗肿瘤治疗药物的最佳选择之一。靶向药物的选择依赖于患
者肿瘤中分子靶点的检测和确认,即其对患者的选择性和针对性特别强。已证实 EGFR 基
因突变与 TKIs 分子靶向治疗临床敏感性之间密切相关,使用 EGFR-TKIs 之前应当进行
EGFR 突变检测已经逐步被临床学者所公认。利用分子诊断技术对靶向药物敏感性和疗效的
预测因子—EGFR 基因突变进行无创性、动态性检测,也因之成为现阶段 NSCLC 分子靶
向治疗广泛应用的必要前提,并成为肿瘤治疗学从传统的“治疗反应性模式”向“个体化
预测模式”转变的迫切要求。相较于经典的基因测序分析,目前常用的基因突变检测技术
尽管灵敏性和特异性有所提高,但大多需采用手术切除或活检瘤组织,对肿瘤细胞量的要
求也较高,而临床最需获得 EGFR-TKIs 个体化预测依据的晚期与复发 NSCLC 患者,一方
面失去了手术机会,另一方面穿刺活检为有创性检查,医疗风险大,部分患者组织标本的
获取也存在困难。另外,由于瘤细胞生长活动的动态性,组织标本在反映手术、放化疗后
一段时间 EGFR 突变真实情况方面有很大局限。因此,利用外周血游离 DNA 对 EGFR 突
变进行无创性、动态性检测成为临床研究者探索 TKIs 治疗敏感性和疗效监测指标的主流
思路。研究发现肿瘤患者的血清中存在游离 DNA,这类 DNA 主要来自肿瘤组织中凋亡、
坏死崩解的肿瘤细胞;实体瘤发生过程中也常有少量癌细胞从原发部位脱落进入血循环,
其 90%以上发生凋亡而释放遗传物质。众所周知,EGFR 突变是肿瘤特异性的体细胞遗传
改变,仅见于肿瘤组织特别是 NSCLC,而正常细胞不存在此类突变,显然若 NSCLC 患者
原发或转移灶中存在 EGFR 突变,通过外周血游离 DNA 就可能检测到。现阶段,有关利
用患者外周血进行 NSCLC 分子靶向治疗个体化预测及疗效监测的研究报道尚不多见,
2009 年,Rosell 等报道利用实时荧光定量 PCR(Fluorescence quantitive polymerase chain
reaction ,FQ-PCR)技术检测已知肿瘤组织 EGFR 突变阳性的患者外周血样本,在 164 例
外周血样本中发现 97 例 EGFR 存在突变,符合率达 59%。FQ-PCR 技术是近年来应用较广
泛的技术,主要用于基因分型、定量和定性分析等方面,具有 PCR 反应的高效性,通过设
计特异性引物和探针,借助荧光信号即可判断 EGFR 基因有无突变。迄今为止,尚未见到
国内关于应用 FQ-PCR 检测患者外周血 EGFR 突变状态的研究,更缺乏其临床配对样本的
循证医学资料。为此,本研究应用 FQ-PCR 技术对 NSCLC 患者外周血和肿瘤组织的 EGFR
突变状态进行配对检测,分析该方法检测患者外周血 EGFR 突变的敏感性,及其与肿瘤组
织中阳性突变的一致性,探讨临床应用 FQ-PCR 技术进行 NSCLC 分子靶向治疗无创性、
I
山西医科大学硕士学位论文
个体化预测的可行性;在此基础上,分析 EGFR-TKIs 治疗的 NSCLC 患者外周血和肿瘤组
织中 EGFR 突变与临床疾病控制率之间的关系,进一步探讨 EGFR 突变状态在 NSCLC 分
子靶向治疗临床疗效监测中的应用价值。
方法:
1. 采用 FQ-PCR 检测 112 例 NSCLC 外周血和 87 例 NSCLC 肿瘤组织中 EGFR 突变,
其中 45 例外周血和肿瘤组织配对检测。FQ-PCR 检测 EGFR 突变的 29 例样本进行基因测
序。分析 NSCLC 外周血和肿瘤患者组织中 EGFR 突变与临床特征的关系,及外周血和组
织中 EGFR 突变的一致性。
2. 61 例入组患者接受了吉非替尼或者厄洛替尼治疗,其中 24 例患者同时检测了外周
血和肿瘤组织 EGFR 突变,21 例单独检测外周血和 16 例单独检测肿瘤组织 EGFR 突变。
评价 EGFR 突变与吉非替尼或者厄洛替尼临床疗效的关系。
结果: