文档介绍：硕士学位论文蛋白质复性新方法的研究论文作者:刘利华指导教师:李伟国副教授学科专业:有机化学研究方向:生物化学华中师范大学化学学院年
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⑨作者娩文】:刹坪华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明日期:矽年眵月弓。日日期:加旯辉鹿H学位论文版权使用授权书原创性声明保密论文注释:本学位论文属于保密,在——年解密后适用本授权书。规定享受相关权益。回童诠塞握变卮进蜃;旦主生;旦二生;旦三生筮查本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师指导下,独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定,即:研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笞袷卮斯娑非保密论文注释:本学位论文不属于保密范围,适用本授权书。导师签名:年本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘夥⒉颊鲁獭保饨ū救说学位论文提交“咝Q宦畚娜氖菘中全文发布,并可按“章程械作者签名:硕士学位论丈日期:月日‘
⑨摘要蛋白酶,侵参镆堵烫逯械牡鞍啄谇酶,主要酶切蛋白前体端延伸的肽段,使1湮3墒斓腄鞍糜诠夂舷低矷忻檀睾衔锏淖樽埃哂形止夂舷低矷鹕耍薷囱饭程的重要作用,该酶切过程是植物进行光合作用必不可少的步骤。由于蛋白酶在光合系统中具有重要作用,因此被认为是一种新型的除草剂作用靶标,目前国内外均在进行基于该蛋白酶靶标的除草剂研究与开发。我们实验室曾经采用基因工程方法,在大肠杆菌中成功地表达了菠菜蛋白,获得了具有生物活性的可溶性蛋白酶,但大部分重组蛋白仍然以包涵体形式存在。为了获得更多具有生物活性的蛋白酶,用于抑制剂先导化合物的筛选,需要对这些无活性的包涵体蛋白进行变复性处理。由于重组蛋白酶在舜凶榘彼岜昵疚牟捎们缀蜕追ǘ园宓白同时进行了复性和纯化,并采用甈缬竞陀ü夤馄追ǘ愿葱院蟮鞍酌傅纯度及复性效果进行了检测。实验结果表明,选用%芤合吹樱仅能够除去部分杂质蛋白,而且不会溶解目的蛋白造成损失。选用盐酸胍作为变性剂溶解包涵体所得蛋白酶的纯度要高于尿素作为变性剂时所得蛋白酶的纯度。采用分步梯度法除去变性剂,包涵体蛋白实现了一定程度的复性,但我们认为效果不甚理想,因此需要改进除去变性剂的方法,或者在复性溶液中加入辅助剂辅助蛋白酶的复性。此外,本文还采用分子印迹法进行了蛋白质复性的研究,选用牛血清白蛋白作为模板分子制备了印迹聚合物,洗涤后进行了再结合实验,并选用蛋白质结合效率较高的印迹聚合物作为固定相,对变性后的牛血清白蛋白进行了柱上复性,采用荧光光谱法对其复性效果进行了初步检测。结果表明,分子印迹聚合物作为固定相用于牛血清白蛋白的柱上复性,可以得到较理想的结果,证实了分子印迹法用于蛋白质复性研究的可行性,为下一步采用该方法用于蛋白酶包涵体蛋白的复性研究奠定了基础。关键词:蛋白酶;包涵体;亲和色谱法;分子印迹法硕士学位论文畉‘
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⑥目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第一节蛋白质复性的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯蛋白质复性的研究背景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯蛋白质的复性方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“第二节蛋白质分子印迹技术的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究背景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”蛋白质分子印迹聚合物的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”.肿佑〖>〖>〖>酆衔锏闹票阜椒ā蛋白质分子印迹技术的应用及发展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”.鞍字史肿佑〖<〖<〖<际醴⒄骨熬啊第三节选题意义、论文设计及创新之处⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯选题意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯设计思路⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.〖7ǜ葱缘鞍字省第二章亲和层析法复性蛋白酶包涵体蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.