文档介绍：关于蚕豆病阅读下列案例,根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。案例:患儿,男性,3岁,因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后,今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色,面色苍白。据家长反映,患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查:体温38℃,脉搏150次/分,呼吸40次/分,血压80/60mmHg,呼吸急促,神清,萎靡,面色苍白,皮肤及巩膜黄染,体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常,肝、脾未触及,双肾区无叩击痛,神经系统检查未及异常。实验室检查:×1012/L,血红蛋白53g/L,µmol/L,µmol/L,µmol/L,尿蛋白(++),潜血(+),尿胆红素(-),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞。,初步判断患儿是何种疾病?(必答)。(必答)要求:实验名称,实验方法,主要试剂和仪器,实验操作流程及注意事项,结果如何分析。。(必答),可以用哪些技术检测什么目的基因?(选答),为什么?(选答)初步判断患儿是患蚕豆病G-6-PD/6PGD定量比值法检测红细胞G-6-PD活性原理:NADPH可使氢化硝基四氮唑蓝(NBT)由浅黄色还原为紫色的甲膳。此法另设一管,将底物改为6PGD,两管所测的值相比,即可得出比值。正常值为>,≤。实验方案实验器材:恒温水浴箱,可见分光光度计试剂:硝基四氮唑蓝定量法试剂盒:硝基四氮唑蓝(NBT)1支,吩嗪甲脂硫酸盐(PMS)1支,6磷酸葡萄糖酸(6PG)溶液1瓶,葡萄糖6磷酸(G6P)溶液1瓶,,ACD抗凝剂。,定容至6ml,做终止液。将NBT1支用3ml蒸馏水溶解。、NBT1ml、,混匀,即成为反应试剂A;、NBT1ml、,混匀,即成为反应试剂B。··,混匀。吸取50ul,加入1ml蒸馏水,制成溶血液备测。取试管2支,标1、。,分别加至1、2号试管内,然后将试管置于37℃水浴箱中准确保温30min。取出试管,。以蒸馏水作空白对照,于650nm波长处读取1、2号管的光密度值(S1和S2)。G-6-PD/6PGD=S1/S2,G-6-PD/6PGD≤,则为G-6-PD缺乏,判断为阳性;G-6-PD/6PGD>,则为G-6-PD正常,判断为阴性。G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维持还原型谷胱甘肽(GSH)的还原性(抗氧化作用),在遇到蚕豆种某种因子后更诱发了红细胞膜被氧化,红细胞膜上的磷脂分子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质,损害细胞膜,导致红细胞的大量破坏。蚕豆病机制在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多,超过肝细胞的摄取、转化和排泄能力,造成血清游离胆红素浓度过高。此时,血中结合胆红素的浓度变化不大,重氮反应实验(凡登白)间接反应阳性,尿胆红素阴性。由于肝对胆红素的摄取、转化和排泄增多,从肠道吸收的胆色素原增多,造成尿胆色素原增多。实验室检查的生化代谢解释