文档介绍：蛇葡萄素(AMP)对SPCA1细胞增殖的抑制作用
作者:吴建军任润珍刘凯刘永琦吴勇杰
【摘要】目的检测蛇葡萄素(Ampelopsin,Amp)对人小细胞肺癌细胞(SPCA1)的细胞毒性,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法检测Amp(~200 μg/ml)对SPCA1细胞的增殖抑制作用。应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率和细胞周期变化。用HE染色和透射电镜观察蛇葡萄素单用和与卡铂联用引起的人SPCA1的形态学变化。应用共聚焦显微镜检测Amp(50,100 μg/ml)对SPCA1细胞内Ca2+、H+和线粒体膜电位的影响。结果 Amp以浓度、时间依赖性地抑制SPCA1细胞的增殖,以浓度依赖性地引起细胞凋亡率的升高,使细胞周期阻滞于G2/M期。Amp(100 μg/ml)有诱导细胞凋亡的作用,出现明显的凋亡晚期特征即凋亡小体。与对照组比较,Amp引起细胞内Ca2+、H+浓度升高和线粒体膜电位降低。结论 Amp可抑制SPCA1细胞增殖,同时诱导凋亡发生,此作用可能与细胞阻滞于G2/M期、Ca2+和H+升高有关。
【关键词】蛇葡萄素(Amp);SPCA1细胞;增殖抑制
黄酮类化合物是植物次生代谢产物,广泛地存在于药用植物的根、叶、皮、果实中,以游离或与糖结合为苷的形式存在〔1〕。该类化合物不仅种类数量繁多,而且结构复杂多样,表现出多种生理活性〔2〕。蛇葡萄素(Amp) 属于小分子黄酮类化合物,是指两个苯环通过中央三碳链相互连结而成的C6C3C6化合物〔3〕。研究证实,Amp对酪氨酸激酶有强烈的抑制作用〔4〕,并在一系列的抗肿瘤实验中得以体现〔5〕。本实验研究了Amp对小细胞肺癌(SPCA
1)细胞增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制,为Amp在临床上的最终开发应用提供了依据。
1 材料与方法
材料与仪器
Amp由广东泰禾医药科技有限公司(040513) 提供,纯度97% 以上; SPCA1细胞由兰州大学药学院药理学教研室提供;注射用卡铂,购自齐鲁制药有限公司(04100161); RPMI 1640培养基,购自Invitrogen公司;新生牛血清,购自杭州四季青公司; 噻唑蓝(MTT)、碘化丙啶(PI),Sigma公司;荧光探针均购自Molecular Probe公司。其余试剂均为国产分析纯。CO2培养箱,Shellab公司;相差倒置显微镜,Olympus 公司;ELX180酶标仪,BLOTEK Instruments公司。
方法
分组和给药方法
取对数生长期细胞,细胞数为4×104/ml,加入96孔细胞培养板,分为对照组、试验药物组、阳性药物组,24 h后分别加入5% 的DMSO、Amp(~200 μg/ml)、卡铂。
Amp对SPCA1细胞的抑制作用
依上法处理细胞,在37℃、5% CO2、饱和湿度条件下分别培养48、72 h,每孔加入10 μl MTT(5 mg/ml),4 h后每孔加入10%的十二烷基硫酸钠(SDS) 100 μl,充分振荡,用酶标仪在570 nm处测定OD值,计算抑制率。抑制率(IR) =〔1-(用药孔平均吸光度)/(对照孔平均吸光度)〕
×100%。
Amp对SPCA1