文档介绍：CIK细胞对白血病微小残留病作用的研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:肖中平封韬王雪野韩梅肖中平
【摘要】目的观察CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞的杀伤作用,对G0期CD34+白血病细胞的细胞毒作用,及对正常骨髓造血干细胞的影响。方法取急性白血病(AL)化疗后、慢性粒细胞白血病(CML)慢性期及正常人外周血单个核细胞加入一系列细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测CIK表型,G带法分析CIK细胞核型。冻存、复苏后作为靶细胞,MTT法测定CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞杀伤作用。AO染色法测定复苏后G0期急性粒细胞白血病(AML) CD34+细胞比例及培养后CML CD34+细胞中G0期细胞比例。流式细胞仪检测CIK细胞杀伤前后G0期CD34+细胞比例变化。半固体培养法检测CIK细胞对正常骨髓CFUGM、BFUE集落形成的影响。结果 CIK细胞可从白血病患者外周血中获得,来源于正常淋巴细胞,对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用,对G0期白血病细胞有明显抑制作用,对正常造血干细胞无杀伤作用。结论 CIK细胞可作为清除残留白血病细胞的有效工具。
【关键词】白血病;微小残留病;CIK细胞
完全缓解的白血病患者体内,常残存耐药的、处于静止期的微小残留白血病细胞,是复发的根源。本研究从白血病患者外周血中培养出的CIK细胞,不含有白血病干细胞,能有效杀伤G0期CD34+白血病干细胞,而且这种杀伤作用具有选择性,不损伤正常造血干细胞,可以作为有效的免疫细胞来清除白血病患者体内的为微小残留病(MRD),值得临床使用。
1 材料和方法
对象
本院血液科2005年1月至2
008年10月15例急性白血病(AL)治疗后完全缓解(CR)患者,5例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期患者,5例正常人。诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》〔1〕。
试剂和仪器
白介素(IL)1,英国Pepro Tech INC公司;IL2,沈阳三生公司;CD3抗体,美国PharMingen公司;干扰素(IFN)γ,英国Pepro Tech INC公司;CD3FITC单抗、CD56PE单抗、CD34APC单抗、IgGFITC单抗、IgGPE单抗,美国PharMingen公司;EPICS XL流式细胞仪,美国贝克曼库尔特公司。
方法
CIK细胞的培养与测定
(1)CIK细胞的诱导与培养:取15例AL化疗后CR患者、5例CML患者、5例正常人外周血分离单个核细胞,第1天加入IFN
γ 1 000 μl/ml,第2天加入CD3单抗50 ng/ml、IL2 1 000 μl/ml、IL1 100 μl/ml,诱导培养CIK细胞。(2)流式细胞仪(FCM)检测CIK细胞表型:在培养至第1、2、3周时,分别取105 CIK细胞,标记CD3FITC单抗、CD56PE单抗20 μl,对照管加入IgGPE、IgGFITC 20 μl,避光孵育20 min,用PBS洗涤后,再加1 g/L多聚甲醛固定,4℃避光保存,1 w内上机检测。(3)染色体G带法分析CIK细胞核型:取4例CML 患者、1例APL患者外周血单个核细胞培养至第3~