文档介绍:TRAIL与DDP联合应用对急性淋巴细胞白血病细胞增殖作用的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:毕林涛高长斌卢振霞宿晓云
【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)与顺铂(DDP)联合应用抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖的可能机制。方法 MVTRAIL转染人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat,Western印迹检测细胞中TRAIL蛋白表达情况,以及单独或联合应用TRAIL及DDP处理的各组白血病细胞中,凋亡相关蛋白caspase3、NFκB和survivin表达水平的变化。结果 DDP组及联合用药组明显抑制了survivin蛋白的表达,DDP组、TRAIL转染组及联合用药组细胞caspase3表达上调,核因子(NF)κB表达下降,且联合用药组作用强于单独用药组。结论 TRAIL和DDP可通过caspase、NFκB途径抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,同时DDP通过对survivin的调节发挥对TRAIL的协同作用.
【关键词】 TRAIL;DDP;急性淋巴细胞白血病;凋亡机制
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosisinducing ligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的新成员,可诱导肿瘤细胞发生快速、高效的凋亡反应,而对正常细胞无明显毒性,这一特点使其成为近年来肿瘤治疗的研究热点。然而体外实验也观察到肿瘤细胞对TRAIL产生耐药的现象,因此,学者们开始探索TRAIL与其他抗肿瘤药物联合应用的价值,并探讨TRAIL耐药的可能机制。当TRAIL与一些能诱导DNA损伤的方法合用〔1,2〕,可以增强其诱导凋亡的能力。目前研究表明,TRAIL与多种药物联合应用具有协同效应,但其中确切的相互作用机制尚不清楚。本实验选择急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat作为研究对象,应用化疗药物顺铂(DDP)和pCMV
TRAIL表达载体分别进行处理,观察不同药物处理组细胞中凋亡相关蛋白表达的变化,以确定TRAIL与化疗药物顺铂是否具有协同作用,并探讨其可能机制,为白血病的治疗提供新的策略和理论依据。
1 材料与方法
实验材料 RPMI 1640培养基,胎牛血清购自Gibco公司;脂质体2000购自Invitrogen公司;鼠抗人TRAIL、survivin、caspase3、核因子(NF)κB单克隆抗体购自美国Santa公司;PVDF膜、ECL购自Millipore公司;顺铂注射液购自江苏豪森公司;人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat由实验室自行保存并培养;重组质粒pCMVTRAIL由本实验室自行构建并保存。
方法
Jurkat细胞培养及转染人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat由本实验室常规培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液中,37
℃,5% CO2培养箱中生长。取对数生长期细胞,离心后用无抗生素培养基稀释,以2×106细胞/ml 浓度接种于6孔培养板中。取4 μg质粒和10μl Lipofectamine 2000,分别稀释于250 μl不含血清和抗生素的培养液中,轻柔混匀,室温静置5 min后,将二