文档介绍：COX2基因在大肠癌的表达及其意义
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:王淑强李秀娟李鹏武欣王琳冬
【摘要】目的探讨COX2基因在大肠癌中表达的意义。方法收集手术切除的大肠癌标本58例,同时选取大肠癌远端正常黏膜组织10例,应用流式细胞术(FCM)检测大肠癌及正常黏膜中COX2表达情况,根据平均荧光强度计算荧光指数(FI)。结果 COX±,高、中、±、±、±±,高、中、低分化及黏液癌组COX2表达均明显高于正常黏膜组(P<);大肠癌淋巴结转移组平均FI值(±)显著高于无淋巴结转移组(±)(P<)。COX2的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的发生部位等无关。结论 COX2在大肠癌中表达异常增高,并与淋巴结转移密切相关。
【关键词】大肠癌;COX2;流式细胞术
近年来研究表明,环氧合酶(COX)2在多种肿瘤中均呈高表达,在肿瘤发生、发展、分化、转移中起重要作用。在细胞癌变过程中,Wnt通路异常变化可能具有重要作用,COX2是Wnt通路的靶基因,可通过增强MMPs的表达,促进肿瘤的转移〔1〕。本研究采用流式细胞术检测大肠癌及大肠远端正常黏膜中COX
2的表达情况,探讨COX2在大肠癌发生、发展和转移中的作用,为预测大肠癌浸润和转移提供理论依据。
1 材料与方法
一般资料
收集手术切除的大肠癌标本58例,男28例,女30例,年龄30~78岁()。病变部位:结肠癌22例,直肠癌36例;分化程度:高分化腺癌26例,中分化腺癌20例,低分化腺癌6例,黏液腺癌6例;转移情况:有淋巴结转移31例,无淋巴结转移27例。同时选取大肠癌远端正常黏膜组织10例。
方法
试剂
兔抗人COX2单克隆抗体(Santa Crus Biotechonlogy,INC),羊抗兔IgGFITC,DAB显示剂,均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
实验步骤
单细胞悬液的制备:石蜡包埋组织HE染色,切成40 μm厚的组织片5片,放入10 ml的试管中,加入二甲苯8 ml,在室温下脱蜡2 d,其间更换2次二甲苯,石蜡脱净后,弃去二甲苯;依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5 ml,每步10 min,加入蒸馏水 5 ml,10 min后弃之。加入2 ml %胰蛋白酶()消化液,置37
℃恒温水浴中消化30 min,在消化期间,每隔10 min用振荡器振荡1次,消化30 min后,立即加生理盐水终止消化,经300目尼龙网过滤,未消化好的组织可做第二次消化。收集细胞悬液,以1 500 r/min离心沉淀5 min,再用生理盐水漂洗2次,以800 r/min离心沉淀5 min,去碎片。细胞的免疫荧光标记:取单细胞悬液1×106/ml,加入兔抗人COX ml室温孵育30 min,加入PBS 10 ml 洗涤1次,弃上清,加入羊抗兔FITCIgG二抗工作液10 ml,避光室温孵育30 m