文档介绍：Id3基因在心肌营养素1促心肌成纤维细胞增殖中的作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:周瑞红李菊香夏子荣颜素娟谭秋波
【摘要】目的探讨在高静水压条件下分化抑制因子3(inhibitory of differentiation 3,Id3 )基因在心肌营养素1 (cardiotrophin1,CT1 ) 促心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 3~4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组( C 组)、CT1反义寡核苷酸组(ASODN组) 、正义寡核苷酸组( SODN组)、高静水压组( P 组)。利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h。CT1活性通过 Western印迹法分析测定,Id3基因表达通过RTPCR方法测定,MTT测定心肌成纤维细胞增殖。结果高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖,CT1表达上调,Id3 mRNA表达增加;CT1 ASODN干预后能抑制高静水压所致的细胞增殖,CT1表达下调,Id3 mRNA表达减少。结论 Id3 mRNA在心肌成纤维细胞中有明显表达,且与CT1促心肌成纤维细胞增殖密切相关。
【关键词】心肌营养素1 ;心肌成纤维细胞;分化抑制因子3
近年有研究发现心肌营养素
1 ( CT1 )与高血压心室重塑有一定的关联,在12周龄的自发性高血压大鼠(SHR)的肥厚心室肌中,CT1 mRNA明显升高〔1〕。另有研究发现,内源性或外源性的CT1能刺激成纤维细胞合成DNA及胶原,促进成纤维细胞生长〔2〕。分化抑制因子(Id)3作为血清诱导的立即早期基因在小鼠成纤维细胞系中被首次发现,其基因由3个外显子和2个内含子组成〔3〕。Id3参与多种细胞生物学过程,包括骨骼肌的分化、血管平滑肌的增殖、胚胎的神经形成、骨和血管发生等〔4~7〕,表明CT1与Id3均存在于成纤维细胞中,且都有促进细胞增殖的作用,但他们之间是否存在某种联系,Id3在心肌成纤维细胞中的表达情况及 CT1促心肌成纤维细胞增殖的作用是否与Id3有关尚未见报道。
1 材料与方法
材料
出生1~3 d的SD乳鼠(南昌大学医学院医学实验动物科);RTPCR试剂(Promega,USA);Trizol( Invitrogen,USA);DEPC,二甲基亚砜(DMSO)(Ameresco,USA); DL2000 DNA Ladder Marker (上海生工) ;MTT增殖检测试剂盒(Sigma,USA) 。
方法
心肌成纤维细胞的原代培养及鉴定
在无菌条件下摘取4~5只大鼠心脏, 分离心室利用蛋白酶消化心肌组织, 差速贴壁法获得原代心肌成纤维细胞。第 3~4代细胞用于实验。鉴定方法参照文献〔9〕。
CT
1反义链与正义链的设计与合成
以硫代磷酸修饰反义和正义寡核苷酸链,由上海生物工程有限公司合成,各自序列为:CT1反义寡核苷酸链(ASODN):5′AGGCTGAT3; CT1正义寡核苷酸链(ASODN):5′TG′A3′。
实验分组及干预措施

①空白对照组(C) :大气压下培养; ②高静水压组(P) :160 mmHg 压力下培养8