IL1受体拮抗剂对大鼠肝星状细胞Ⅰ、 Ⅲ型胶原及TIMP1 mRNA表达的影响.doc

文档介绍：IL1受体拮抗剂对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP1 mRNA表达的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:邓存良, 黄捷, 陈文, 王明勇, 陈枫
【摘要】目的: 研究白细胞介素1受体拮抗剂(IL1ra)对大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)基因表达的影响, 探讨IL1ra抗肝纤维化作用的机制。方法: 原位分离、培养大鼠HSC, 荧光显微镜观察及免疫细胞化学染色法鉴定。用1 μg/L、 10 μg/L、 100 μg/L3个浓度的IL1ra分别作用于HSC 48 h, 实时荧光定量RTPCR法检测ColⅠ、 ColⅢ和TIMP1 mRNA的表达。结果: 对照组ColⅠ、 ColⅢ和TIMP1 ±、 ±、 ±。加入1 μg/L、 10 μg/L、 100 μg/L IL1ra后ColⅠ±、 ±、 ±; ColⅢ±、 ±、 ±
; TIMP1 ±、 ±、 ±, 与对照组比较, 不同浓度处理组ColⅠ、 ColⅢ和TIMP1 mRNA的表达均明显降低()。结论: IL1ra以剂量依赖方式抑制HSC中ColⅠ、 ColⅢ及TIMP1 mRNA的表达, 具有抗纤维化作用。
【关键词】肝星状细胞白细胞介素 1受体拮抗剂Ⅰ型胶原Ⅲ型胶原基质金属蛋白酶组织抑制因子 1
肝纤维化是所有慢性肝病共有的病理改变。IL1是纤维化形成过程中重要的细胞因子。可以活化肝星状细胞(hepatic stellar cell, HSC), 进而促进其分泌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白等多种细胞外基质成分及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs), 从而促进肝纤维化的发生发展。我们的前期工作表明白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin Ⅰ receptor antagonist, IL1ra)可抑制肝纤维化大鼠星状细胞的增殖和胶原的合成, 减少肝脏细胞外基质的沉积[1]。有研究发现IL1β受体拮抗剂可降低TIMP1 mRNA的表达[2]。本试验的目的是系统观察IL1ra对HSC表达Ⅰ型胶原(CollagenⅠ, ColⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ, ColⅢ)和TIMP1基因的影响, 探讨IL1ra抗肝纤维化作用的机制。
1 材料和方法
材料 Wistar雄性大鼠(质量450~500 g), 购自第三军医大学西南医院实验动物科。IL1ra 由北京大学医学部马大龙教授惠赠; 鼠抗人结蛋白(desmin)单克隆抗体(mAb)购自DAKO公司; 实时荧光检测试剂盒购自美国Bio
Rad公司; PCR引物由上海生物工程公司合成部合成; 总RNA提取试剂盒购自上海华舜生物工程有