文档介绍：iNOS与COX2对H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的影响
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:陈秀琴李景田邹锦慧张慧明周小磺李佰灵
【摘要】目的探讨iNOS与COX2在H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测iNOS与COX2蛋白表达水平。结果用10 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制50 μmol/L H2O2作用24 h后引起的细胞凋亡,并可明显地促进PC12细胞iNOS与COX2蛋白表达;选择性iNOS抑制剂AG和COX2抑制剂NS398分别阻断H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用。结论 iNOS和COX2均介导了H2O2预处理诱导的抗凋亡作用。
【关键词】过氧化氢;预处理;iNOS;COX2
目前认为帕金森病患者脑内氧化应激反应过强,活性氧(reactive oxygen species,ROS)在其中起重要作用。过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(O-2)属于ROS 。Ravati等〔1〕发现ROS预处理培养的神经元能对抗不同伤害因子的损伤作用并能防止随后的大量氧自由基的生成。有报道,H2O2预处理能保护人近曲小管细胞〔2〕和大鼠成纤维细胞L
细胞〔3〕对抗致命的氧化损伤;低浓度的H2O2预处理能诱导PC12细胞产生对抗高浓度H2O2引起的细胞凋亡,具有细胞保护作用〔4〕。有研究证实〔5〕诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX2)的表达上调可能参与了缺血预处理的延迟保护作用,而iNOS与COX2对H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用迄今未明。本文在具有神经元形态及功能特征的PC12细胞建立H2O2预处理适应性细胞保护实验模型,探讨iNOS与COX2对H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用的影响。
1 材料与方法
试剂碘化丙啶(PI)、Rnase A特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)和选择性COX2抑制剂NS398购自Sigma公司;RPMI1640培养基、马血清、胎牛血清购自GibcoBRL公司;特异性兔抗鼠iNOS单克隆抗体和COX2单克隆抗体购自美国SantaCrug公司;羊抗兔IgGFITC购自武汉博士德公司;H2O2(分析纯)购自广州化学试剂厂。流式细胞仪为美国BEKMANCOULTER公司产品(ELITE,激光波长488 nm,功率15 mW)。
细胞培养和预处理方法 PC12细胞由中山大学实验动物中心提供,培养于含10%马血清、5%胎牛血清的RPMI1640培养基中。于37℃、5%CO2条件下培养,选取对数生长期细胞进行实验。H2O2预处理:PC12细胞被10 μmol/L H2O2作用90 min,然后撤去H2O2,继续常规培养24 h〔1〕,接着由50
μmol/L H2O2作用24 h。
PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡收集多组细胞,PBS洗2遍,用体积分数为70%乙