MyD88在OK432诱导树突状细胞成熟中的作用.doc

文档介绍：MyD88在OK432诱导树突状细胞成熟中的作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:倪秀雄刘丽燕刘永建曾真袁明洲陈玄
【摘要】目的探讨小鼠骨髓树突状细胞(DCs)髓性分化蛋白88(MyD88)在OK432诱导DCs 成熟中的作用机制。方法分离小鼠骨髓单核细胞(BMMCs),在含10%胎牛血清、重组小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子(rmGMCSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL4)的培养体系中诱导培养,所得的细胞即为DCs。于培养的第5天,将细胞分为3组:对照组不加OK432和MyD88 siRNA;OK432组加入终浓度为5 μg/mL的OK432;RNA干扰组加入MyD88 siRNA 12 h后,再加入5 μg/mL OK432刺激。半定量RTPCR法检测DCs中MyD88的表达;ELISA法检测各组DCs分泌肿瘤坏死因子α(TNFα)和IL12的能力;MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性。结果 OK432组DCs的MyD88高表达、TNFα和IL12释放明显增加并能诱导较强混合淋巴细胞反应,而用MyD88 siRNA干扰后以上效应均降低()。结论靶向MyD88 siRNA可明显抑制小鼠DCs中MyD88的表达和OK432诱导的DCs成熟,表明MyD88介导OK
432诱导的DCs成熟。
【关键词】树突状细胞; RNA,小分子干扰; 毕西巴尼; 免疫耐受
树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前所知的体内功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresenting cell,APC),能够显著刺激初始T细胞进行增殖,并具有激活免疫应答和诱导免疫耐受双重功能。OK432作为GMP级免疫调节剂可安全、有效地提高恶性肿瘤患者的生存率。Kanzaki等研究发现,OK432与常用的DCs成熟诱导剂脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)相比,刺激健康人外周血单个核细胞来源的未成熟的DCs成熟的能力更强[14]。Toll样受体(Tolllike receptors,TLRs)及其信号转导途径在调控DCs的成熟过程中起重要作用[5],而髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是TLRs信号转导途径中关键的衔接分子。在前期实验中,笔者采用OK432联合肿瘤细胞冻融抗原已成功的诱导了小鼠骨髓源性DCs的成熟[6],但其信号途径尚不清楚。本实验采用RNA干扰技术抑制小鼠骨髓DCs中MyD88的表达,进一步证实MyD88在OK432诱导DCs成熟中的作用。
1 材料和方法
材料雄性SPF级615小鼠,6~8周龄[大连医科大学实验动物中心,许可证号:SCXK(辽)20040017];RPMI1640干粉培养基(美国GIBICO公司);胎牛血清(FCS,杭州四季青生物工程材料有限公司);重组小鼠白细胞介素4(rmIL4,美国RD公司);重组小鼠粒
巨噬细胞集落刺激因子(rmGMCSF,美国RD公司);OK432(20081001,山东鲁抗制药公司);红细胞裂解液( mmol/L NH4Cl、16