文档介绍：“三黄补血汤”对失血小鼠的补血作用评价
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【摘要】目的研究三黄补血汤对失血小鼠的补血作用。方法以剪尾法造失血模型,以红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hgb)、促红细胞生成素(EPO)为研究指标,评价三黄补血汤的补血效果。结果造模可使红细胞数和白细胞数减少、血红蛋白含量降低,三黄补血汤有明显的增加红细胞和白细胞数量、血红蛋白含量及EPO水平。结论三黄补血汤显著的补血效果,有进一步研究的意义。
【关键词】三黄补血汤红细胞细胞血红蛋白促红细胞生成素
“三黄补血汤”是中药成方中补血作用较强的一个复方,见于明代张洁所著《仁术便览》[1],其属于中药四物汤的类方,由熟地、生地、牡丹皮、黄芪、柴胡、归身、川芎、升麻、白芍等多味药物组成,有补血益气及升阳之功,用以治疗亡血血虚,六脉俱大,按之空虚者。本实验以红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hgb)、促红细胞生成素(EPO)为研究指标,研究三黄补血汤对失血性贫血小鼠的补血效果。
1 仪器、药品与试剂
OLYMPUS BX51显微镜,OLYMPUS DP70显微摄像头,Sysmex F-820半自动血球计数仪。
中药熟地、生地、牡丹皮、黄芪、柴胡、归身、川芎、升麻、白芍均购自武汉市国药集团。
EPO试剂盒(H-162) sc-7956 Lot.# A2505,Santa Cruz Biotechnology inc, USA;FITC标记羊抗兔IgG(ZF-0311) Lot. GC942496,产地美国Pierce。
实验用小鼠由华中科技大学同济医学院实验动物房提供。
2 方法
中药的分组及提取中药根据文献[1]的相关记载,确定方剂组成及药物剂量,将药物提取。提取方法:药材粉碎至一定细度,加8倍量水,浸泡30 min,煎煮30 min,倾出药液,压滤,药渣加入4倍量水,煎煮25 min,压滤。2次煎煮均回收馏出液。合并液体,减压浓缩至一定浓度,加入乙醇至终浓度达60%,低温存放48 h,过滤沉淀,回收乙醇,调整至药材与溶液量比(g∶ml)为1∶2。
给药量的确定根据文献[2]中动物与人体表比换算法, 由成人剂量换算成小鼠用药量。
血虚动物模型的制备根据文献[3]取小鼠,以75%酒精擦拭尾部使血管扩张,~,然后将尾端伤口浸入37℃温水中, ml。
给药及取血方法将实验小鼠分为正常组、手术组(不给药)、手术后给药组。各组动物为10只,其中手术组与给药组(共3组)均需按血虚动物模型制备方式处理,而给药组(共3组)在失血后1 h给予药物,按照人与鼠的体表面积折算给药量,灌胃2次/d。共饲养3 d,第4天早晨断头取血,收集血液。
RBC、WBC、Hgb、EPO测试进行RBC、WB
C及Hgb测试,用Sysmex F-820半自动血球计数仪进行测定;运用免疫荧光法对EPO含量进行测定,老鼠血液离心(1 500 r/min,10 min)取上清液,涂片,加EPO试剂1∶200孵育12 h,再加FITC标记羊抗兔IgG反应30 min,在荧光显微镜观察。
3 结果