文档介绍：SHP1表达与慢性粒细胞白血病进展的初步研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)

【摘要】目的: 探讨SHP1表达与CML急变的关系;构建SHP1真核表达载体. 方法: 应用RTPCR比较慢性期和急变期CML患者原代细胞中SHP1的mRNA转录本水平;SHP1的测序,检测其mRNA和蛋白表达. 结果: 急变期患者SHP1转录本水平明显下降,与正常对照间存在统计学差异;SHP1转染K562细胞,可表达SHP1 mRNA和蛋白. 结论: SHP1的表达下调可能与CML由慢性期朝加速/急变期演化过程有关;SHP1.
【关键词】白血病髓样进展期 SHP1
0引言
慢性髓系白血病(chronic myeloid leukaemia, CML)是一种累及造血干细胞的恶性克隆增殖性疾病,近90%的患者肿瘤细胞中可以检测到BcrAbl融合基因,该基因催化自身和一系列底物的酪氨酸残基(tyrosine
residue,Tyr)发生过度磷酸化,导致多个信号传导通路的异常激活,最终导致CML的发生. SHP1是蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase,PTP)家族的重要成员,能够通过催化受体Tyr残基“去磷酸化”抑制信号传导. 我们应用RTPCR比较了慢性期和急变期CML患者原代细胞中SHP1的mRNA转录本水平,并克隆SHP1全长cDNA序列,构建真核表达载体,以用于进一步研究SHP1在CML发病及进展中的潜在作用.
1对象和方法
(男6,女5)例,中位年龄28岁. 患者骨髓单个核细胞经按G显带制备染色体及核型分析和/或间期荧光原位杂交检测发现有Ph染色体和或/BcrAbl融合基因(表1),临床诊断慢性期7例,急性期4例. 正常对照选择骨髓未受浸润的恶性淋巴瘤患者3例. 均抽取无菌肝素抗凝骨髓3~5 mL,Ficoll分离单个核细胞,预冷PBS(pH=)洗涤细胞2遍备用. HEL细胞和K562细胞购自上海细胞生物研究所;RPMI1640培养基为Gibco产品;胎牛血清为杭州四季青产品;MMLV逆转录酶和Taq酶为Promegar产品;总RNA提取试剂和Oligo(dt)15购自上海博彩公司;抗SHP1多克隆抗体购自BD Transduction Laboratories公司;RIPA细胞裂解液和低分子量蛋白Marker购自上海申博生物公司;人红白血病细胞HEL和CML急变K562细胞在含100 mL/L胎牛血清的PRMI1640培养液中,于37℃,50 mL/L CO2,饱和湿度的培养箱中培养, 每24~36 h传代1次,

mRNA的表达SHP1上游引物:5′ 3′,下游引物:5′ 3′,扩增产物414 bp[1]. 细胞中甘油醛3磷酸脱氢酶(GAPDH) cDNA的水平也被检测作为内对照,GAPDH上游引物:5′A 3′,下游引物:TTCTTG 3′,扩增产物590 bp. 实验组和对照组