文档介绍：TRAIL与DDP联合诱导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:毕林涛高长斌宿晓云卢振霞
【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与顺铂(DDP)联合应用对急性淋巴细胞白血病细胞的抑制作用,为白血病的临床治疗提供新思路。方法 MVTRAIL,用脂质体法进行细胞转染,MTT法检测单独或联用TRAIL及DDP处理的各组肿瘤细胞的增殖变化,FCM技术检测细胞凋亡变化。结果 DDP组、TRAIL转染组及联合用药组细胞增殖抑制率均高于空白对照组(均P<),且联合用药组高于单独用药组(P<);FCM示凋亡率也明显增高。结论 TRAIL和DDP联用可抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,具有协调作用。
【关键词】肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体;顺铂;急性淋巴细胞白血病;凋亡
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosisinducing ligand,TRAIL)属于Ⅱ型跨膜蛋白质,具有在体外或体内大量、快速诱导凋亡的作用。与其他可诱导凋亡的物质不同,TRAIL能够选择性杀伤肿瘤细胞,而正常细胞可逃逸其诱导凋亡的作用,这引起了众多研究者的兴趣。当TRAIL与一些能诱导DNA损伤的方法,如化疗或放疗联合应用时,可增强其诱导凋亡的能力〔1,2〕。目前国内外学者已有应用TRAIL联合顺铂、依托泊甙、阿霉素、氟尿嘧啶、丝裂霉素等化疗药物处理胶质瘤细胞、间皮瘤细胞、结肠癌细胞以及肝癌细胞的研究报道〔1,3~5〕,但联合应用诱导凋亡的机制尚未完全阐明。本研究将单独或联合使用TRAIL及化疗药物顺铂(DDP),观察不同方案对Jurkat细胞体外增殖的抑制作用,以确定DDP与TRAIL联合应用是否具有协同效应,并对其机制进行初步探讨。
1 材料与方法
实验材料 RPMI 1640培养基、胎牛血清购自Gibco公司;脂质体2000购自Invitrogen公司;PI染色试剂盒购自北京鼎国生物科技有限公司;顺铂注射液购自江苏豪森公司;MTT购自Sigma公司;人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株由实验室自行保存并培养;MV
TRAIL由本实验室自行构建并保存,已将TRAIL基因克隆至CMV启动子之后。
实验方法
Jurkat细胞培养及转染人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat系本实验室常规培养,生长于含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液中,37℃、5%CO2培养箱中生长。
取对数生长期细胞,离心后用无抗生素的培养基稀释,以2×
106细胞/ml 浓度接种到培养板中,用Lipofectamine 2000进行转染,96孔板中每孔加入Lipofectamine 2000 , μg;6孔板每孔加入Lipofectamine 2000 10 μl,质粒4 μg。具体操作按试剂说明书进行。转染4 h后离心换液去除脂质体,继续培养24 h。
化疗药物亚细胞毒剂量浓度的测定取对数生长期细胞,以2×106细胞/ml 浓度接种至96孔培养板中,每孔200 μl。加入不同浓度DDP,终浓度分别为