文档介绍：单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究
论文关键词单核细胞趋化蛋白1 牙髓炎免疫组化
论文摘要目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在牙髓炎发生、发展中的作用机理,为揭示MCP-1对牙髓炎性疾病发生、发展的作用提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测正常人及急、慢性牙髓炎患者牙髓组织中MCP-1的表达。结果:MCP-1在正常牙髓组织中无表达,在炎症组织中有不同程度的表达。
资料与方法
检测标本来自长春市口腔医院2004年3~9月口腔内科门诊患者,急、慢性牙髓炎各20例,健康牙髓20例(烤瓷牙需要拔髓者),患者年龄18~50岁,所有患者2个月内无服用免疫抑制剂及抗菌药物史,均未做过牙髓治疗。
标本处理:标本用10%中性福尔马林浸泡,常规脱水,石蜡包埋,制备4~5μm厚切片,分别作HE染色和免疫组化染色。HE染色结果作为病理学分组标准,进一步区分各组标本。
主要试剂、仪器:MCP-1单克隆抗体(TBD公司),SABC显色试剂盒(武汉博士德公司),S-P超敏试剂盒(迈新生物)。
免疫组化染色步骤:石蜡切片常规脱蜡水化,PBS冲洗3分钟×3次,高温加热修复抗原(加热至95
℃关火,室温放置自然冷却,蒸馏水冲洗3次,PBS浸泡5分钟);PBS冲洗3分钟×3次;滴加过氧化酶阻断溶液(试剂A)室温下孵育15分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3分钟×3次;滴加正常非免疫动物血清(试剂B),室温下孵育10分钟;除去血清,滴加第一抗体(稀释浓度1∶[KG-*2]50),4℃过夜。PBS冲洗3分钟×3次;滴加生物素标记的第二抗体(试剂C),室温孵育10分钟,PBS冲洗3分钟×3次;滴加链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D),室温孵育10分钟,PBS冲洗3分钟×3次;DAB显色,自来水冲洗,苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。阴性对照采用PBS代替一抗,其余步骤相同。
结果
免疫染色结果显示,在健康牙髓组织中未见明显的MCP-1表达阳性细胞,在急慢性牙髓组织中MCP-1有不同程度的阳性表达,阳性染色细胞数量不均,阳性染色程度不一致,阳性表达为分布于细胞浆呈棕黄色的颗粒状物。表达MCP-1的细胞主要是单核/巨噬细胞和血管内皮细胞,中性粒细胞,成纤维细胞。在慢性炎症牙髓组织中还可观察到新生的毛细血管上有MCP-1表达阳性细胞。急、慢性组阳性表达无统计学差异。
讨论
MCP-1在炎症性疾病中的作用:大量的炎性疾病中都发现了MCP-1的存在,与单核/巨噬细胞免疫作用有关的疾病大多有MCP-1的参与。
首先,MCP-1对单核/巨噬细胞具有激活和趋化的双重作用。实验证明MCP-1促使嗜碱性粒细胞释放组胺的速度相当快,能在1小时内达到最高水平。MCP-1在炎症反应时与单核/巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的激活有关联,在免疫应答中起重要作用,具有促炎的作用。
其次,由于MCP-1的缺失可以导致IL-4、IL-5、IL-10分泌受抑制,从而导致Th2型免疫反应受抑制,MCP-1在Th2型细胞因子的定位方面具有重要作用,促进巨噬细胞选择性激活途径的抗炎过程,是Th2型免疫应答必不可少的重要因素[1]。而正是Th1细胞向Th2细胞的不断转化导致巨噬