文档介绍：再障患者B19病毒抗原检测及临床意义
作者:曹玉红张国成许东亮
【关键词】再生障碍性贫血
关键词: 再生障碍性贫血;人细小病毒B19;免疫荧光技术
0 引言
人细小病毒B19(B19)是与人类疾病密切相关的小DNA病毒,与急性再生障性贫血(AAA)的关系屡有报道
[1] .为探讨B19抗原检测用于诊断AAA患者B19感染的价值及其临床意义,我们应用间接免疫荧光法(IIF)对21例AAA患儿骨髓进行B19抗原检测.
1 对象和方法
对象病例组21例,为1998-01/1999-12在我院儿科和血液科住院的急性再障患者,年龄3~13岁,平均年龄6岁3月,均符合第6版《实用儿科学》,-20℃冰箱冻存,同时收集骨髓涂片,冷丙酮固定15min,-20℃密封保存待检.
方法
IIF法检测再障患者骨髓涂片B19抗原鼠抗B19病毒特异性mAb IgG(一抗)购自的IgG(二抗)购自华美生物工程公司,试验步骤参见文献[2].
①于待检骨髓涂片上加一抗放于湿盒内4℃过夜.②PBS-5g L-1 BSA液漂洗3次,每次5min,吹干.③加荧光二抗,湿盒内37℃保温30~60min.④PBS-5g L-1 BSA液漂洗2次,每次5min,用蒸馏水洗1次.⑤用500g L-1 缓冲甘油封片,.
巢式PCR检测骨髓B19-DNA 巢式PCR所用引物、DNA提取、PCR反应具体步骤及结果观察参见文献[3].
2 结果
21例AAA患者骨髓中有3例B19抗原阳性,其中1例呈弱阳性,另2例呈强阳性,黄绿色阳性荧光信号主要位于细胞膜及胞质周边,呈点状分布,阳性对照骨髓片呈阳性,阴性对照呈阴性;B19-DNA阳性7例;,灵敏度为43%,特异度为100%,总符合率为81%,阳性预告值为100%,阴性预告值为78%.
3 讨论
自1981年Pattison证实B19感染诱发镰状细胞贫血患者再障危象以来,,免疫抑制或缺陷患者纯红细胞再障,,并从包括AAA在内的多种疾病患者临床标本中检出B19-DNA,,,用IIF诊断B19感染时需同时检测B19-DN
A.
目前,(即血型P抗原)介导的细胞(尤其是红系细胞),B19抗原主要位于细胞膜及胞质周边,与国外研究结果基本一致,提示B19对骨髓细胞的直接毒性作用是导致AAA患者血细胞减少的主要原因之一,充分说明人类骨髓为允许B19复制的细胞体系,为B19