文档介绍：人参养荣汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用
作者:刘冰,赵桂芝,王永明,应栩华
【摘要】目的初步探讨人参养荣汤对血管性痴呆的神经保护作用。方法采用永久性结扎双侧颈总动脉血管性痴呆大鼠模型,从学忆、脑梗死面积、海马齿状回新生神经细胞和自由基损伤等方面初步考察人参养荣汤的神经保护作用。结果与模型组比较,人参养荣汤组认知障碍明显改善,脑梗死面积明显降低,齿状回新生神经细胞明显增加,自由基损伤明显减轻。结论人参养荣汤对血管性痴呆具有一定的神经保护作用,其内在机制值得深入探讨。
【关键词】血管性痴呆;人参养荣汤;神经保护;神经发生;认知障碍
人参养荣汤首载于《太平惠民和剂局方》,有益气补血、养心安神等功效。本文观察人参养荣汤对血管性痴呆大鼠认知障碍、神经发生和自由基损伤等方面的影响,现报道如下。
1 材料与方法
实验动物 Wistar雄性大鼠,体重220~260g,北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证编号SCXK(京)2002-2003。
模型复制、分组与给药取大鼠30只, 10%水合氯醛麻醉,分离双侧颈总动脉,双重丝线结扎后随即剪断。随机分为模型组和人参养荣汤组,2组动物数基本相当。另取大鼠15只,除不结扎动脉外操作如前,设为假手术组。术后次日,各组动物处置如下:假手术组及模型组给予自来水1ml,人参养荣汤组给予人参养荣汤5g/kg(相当于生药含量,本研究所自煎),连续4周。
Morris水迷宫测试前先采用Morris水迷宫(中国医学科学院药物研究所)训练6天,以潜伏期(从入水到找到平台所用时间)和游泳距离(从入水到找到平台的总行程)为测试成绩的指标,每天每只大鼠在4个象限共训练4次,每次游泳时间为60s,第7天成绩记做测试成绩。测试于实验结束前1周进行。
自由基损伤末次给药后6h,每组取6只大鼠,断头,冰上分离海马,称重,以冷生理盐水制成匀浆液(质量体积比1:9),低温分离取上清,考马斯亮兰法测定蛋白含量。按说明书测定MDA、GSH含量和SOD活性。
神经发生末次给药前2天,每组取3只大鼠,以50mg/kg BrdU腹腔注射2次,每次间隔8h。水合氯醛麻醉,4%多聚甲醛灌注,取脑,置于多聚甲醛后固定过夜,20%蔗糖沉底,选择齿状回部位冠状位冰冻切片,脑片厚30
μm,置于磷酸盐缓冲液。常规免疫荧光染色(anti-BrdU稀释比1:400,anti-NeuN稀释比1:500)。摄片并计算BrdU/NeuN阳性细胞数。
脑梗死范围末次给药后6h,每组取5~6只大鼠,断头取脑,剔除嗅球、小脑和低位脑干。将大脑连续冠状切成5片。用1% TTC(氯化三苯基四氮唑)染色,37℃避光温孵15min。按切片顺序排列并拍照,计算脑梗死面积。
统计学处理所有描述性参数以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析。,P<。
2 结果
人参养荣汤对认知障碍的影响水迷宫测试结果表明,造模后潜伏期和游泳距离均显著延长(P<),而人参养荣汤可显著使之缩短(P<),提示其可明显改善血管性痴呆大鼠学忆能力(见表1)。表1 人参养荣汤对认知障碍的影响注:与假手术组比较,△△