文档介绍：人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos蛋白表达的影响
【摘要】目的:探讨人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos表达的影响。方法:分别给大鼠注射人参皂甙Rg1 10、20、40 -1,然后采用大脑中动脉闭塞方法建立脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注24h后c-Fos的表达。结果:与单纯缺血再灌注组相比,人参皂甙Rg1各组c-Fos表达明显降低(P<)。结论:人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤机制可能与抑制脑组织c-Fos表达有关,且以高剂量效果较好。
【关键词】大鼠; 脑缺血; 人参皂甙Rg1; c-Fos
本研究试图对脑缺血再灌注大鼠采用不同剂量的人参皂甙Rg1处理,检测凋亡相关基因c-Fos的表达,探讨人参皂甙Rg1的脑神经保护机制,为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
实验动物与分组
健康SD大鼠,雄性,体重200~250g。随机分为假手术组,单纯缺血再灌注组,人参皂甙Rg1 10、20、40 -1组,尼莫地平组(
-1),每组10只大鼠。人参皂甙Rg1各组分别于术前5d至取材前1h腹腔注射人参皂甙Rg1,尼莫地平组注射尼莫地平,其余各组分别注射等量等渗生理盐水,1次/d。
药品及仪器
人参皂甙Rg1(纯度>95%)购自吉林大学有机化学教研室,经生理盐水稀释后备用;兔抗大鼠c-Fos单克隆抗体购自SANTA CRUZ公司。
大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)的制备
以线栓法制作MCAO模型[1,2]。大鼠麻醉后,由右颈总动脉剪一小口,,以颈总动脉分叉处计算,进线深度为18±,直至大脑中动脉起始部,以完全阻断血供。模型成功的标志是大鼠即刻出现右侧Horner征。栓塞2h后,将尼龙线拔出,即为再灌注模型,再灌注时间为24 h。假手术组插入深度小于15 mm,其他步骤同上。
观测指标及检测方法
①神经功能评分:MCAO术后24h参考Longa等的5分制评分标准对各组大鼠进行评分[3]。
②免疫组化检测及图像分析:MCAO术后24h,断头取脑,石蜡包埋。免疫组化Envision法染色。c-Fos阳性表达呈棕黄色。每组随机选择10张切片,每张切片在缺血侧大脑海马CA1区随机选择5个高倍视野,检测c-Fos蛋白阳性表达的平均灰度。阳性细胞数越多,平均灰度值越小,提示免疫反应越强。
统计学分析
,所有数据均用x ±s表示。多组间差异显著性检验采用单因素方差分析。
2 结果
与单纯缺血再灌注组比较,人参皂甙Rg1各组神经功能评分均明显降低,大鼠行为功能缺陷均获不同程度改善,c-Fos表达的平均灰度值增高,提示阳性表达量降低,见表1。表1 各组大鼠神经功能评分及大脑海马CA1区c-Fos蛋白表达平均灰度注:与Model组比较,△P<, * P< ;与Sham组比较,#P<。
3 讨论
细胞凋亡即程序性细胞死亡,受基因的严格调控。c-Fos基因是一种转录调节因子,正常情况下,c-Fos在脑内表达水平表达,可能与DNA损伤及修复有关,具有保护作用;但多种