替代性活化的巨噬细胞促进淋巴管内皮细胞增殖的机制.doc

文档介绍：替代性活化的巨噬细胞促进淋巴管内皮细胞增殖的机制
【摘要】目的: 观察替代性活化的巨噬细胞(aaMphi)对淋巴管内皮细胞(LEC)增殖的影响机制. 方法: 以重组小鼠IL h,建立aaMphi模型. 采用Transwell系统共培养aaMphi和小鼠LEC,台盼蓝拒染法绘制LEC生长曲线,3HTdR掺入法观察LEC增殖状况,实时定量RTPCR法分别检测共培养前后血管内皮生长因子(VEGF)C,VEGFD mRNA在aaMphi中的表达,以及VEGFR3,Prox1 mRNA在LEC中的表达. 结果: 与aaMphi共培养后,LEC生长速度加快,增殖指数(PI)高于其他对照组. 与共培养前比较,aaMphi表达VEGFC mRNA增加(P<),但表达VEGFD mRNA无统计学变化(P>);LEC表达VEGFR3和Prox1 mRNA均增加(P<, P<). 结论: aaMphi能促进LEC增殖; aaMphi表达VEGFC mRNA和LEC表达VEGFR3, Prox1 mRNA增加是其作用机制之一.
【关键词】巨噬细胞替代性活化淋巴管内皮细胞细胞增殖淋巴管生成
0引言

巨噬细胞在不同的环境中,可以发生不同性质的活化,成为具有不同表型和功能特征的亚群[1],如经典活化的巨噬细胞(classically activated macrophages, caMphi),替代性活化的巨噬细胞(alternatively activated macrophages, aaMphi)和
Ⅱ型活化的巨噬细胞. 近年研究表明,巨噬细胞参与了炎症条件下或肿瘤组织中的淋巴管生成(lymphangiogenesis),但其活化表型及作用机制尚不明确[2]. 淋巴管生成的基本过程包括淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells, LEC)增殖、迁移和管样结构形成等. 我们观察与aaMphi共培养后LEC的增殖状况,并检测共培养前后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)C,VEGFD在aaMphi中的表达以及VEGFR3,转录因子Prox1在LEC中的表达情况,为明确aaMphi在淋巴管生成中的作用提供实验依据.
1材料和方法

()购自美国典型细胞中心. 高糖DMEM培养基、低内毒素胎牛血清(FBS)购自美国Hyclone公司. 含多种生长因子的EBM2培养基购自美国Cambrex公司. 重组小鼠IFNγ和IL4购自美国Cytolab公司. LPS购自美国Sigma公司. 3HTdR购自北京原子能研究所. Tripure购于德国Roche公司. RTPCR试剂盒购于日本TaKaRa公司. 荧光染料SYBR Green1购自上海GeneRay公司. 小鼠VEGFC,VEGFD,VEGFR3,Prox1和βactin引物由上海生工公司合成(表1). 表1小鼠PCR引物核酸序列(略)

小鼠LEC的分离、培养和鉴定见参考文献[3