文档介绍：湖南大学硕士学位论文基于发夹探针基因突变点分析与奘渭觳庑》肿学校代号:级:学位申请人姓名:导师姓名及职称:培养单位:专名称:论文提交日期:论文答辩日期:答辩委员会主席:学号:密业
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刷磴辄≯眵醐一一%月。堋作者虢援题骛慨矽,年多月≯日竣矽,,年日湖南大学学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于年解密后适用本授权书。朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭作者签名:⒈C芸冢/\滩槐C芸凇日期:
要摘单碱基多态性琒是遗传变异中最丰富的形式,人类亿碱基当中每个碱基就可能出现一次单碱基突变。实现对这些基因单碱基突变的早期、准确、简便、快速的确认,对于很多疾病的发病机理研究及早期诊断治疗非常重要。因此丌发一些易于操作、价格低廉且又精确有效的ǜ屑际跻庖逯卮蟆发夹型核酸探针由于具有灵敏度高,特异性好等优点已经被广泛应用于生物传感器的制备。近年来,科学家们通过改变经典分子信标的结构,已提出了许多新型的检测方法。本文中,我们通过对发夹探针的重新设计,发展了两种新颖的ǜ屑际酢4送猓颐峭ü鼶修饰转换信号,实现了对小分子目标物的灵敏检测。主要内容如下:擅钌杓屏艘惶踔踩朊盖形坏愕木哂蟹⒓薪峁沟墓丫酆塑账崃矗迪至一种简单、有效的沟缂觳夥椒āF涮氐阍谟诮岷鲜褂煤怂崮谇忻及纳米金标记的检测探针,能够很好的降低背景值并有效增强信号。方案如下:在电极表面固定具有酶切位点的发夹探针,当待测体系中含有目标保夹探针可以通过与目标链杂交打开,导致内切酶对其没有作用,从而实现纳米金沉积放大作用;反之,在没有目标链时,发夹探针被特异性酶切,无法继续反应,便没有信号产生。实验结果表明,此方法是一种简单实用、选择性高、灵敏度较高的适用于治黾觳獾募际酢4送猓ü灿肊湍勘晷蛄校们还设计了一种用亚甲基蓝作指示剂的电化学方法,进一步验证了我们实验体系的实用性,为基因突变点分析提供了一种新的思路。诙岢隽艘恢值ゲ娇芍馗吹募觳釪单碱基突变的电化学分子开关。实验中采用了一条标记二茂铁的具有发央结构的寡聚核苷酸链,当与目标链杂交打开发夹后被修饰有捕获探针的电极捕获从而拉近电活性物质二茂铁产生很强的电流信号,成功构建了一种信号打开型的电化学传感器。这一方法在基因突变导致地贫的分析检测中得到了实际应用,成功检测了染色体末端嗦胱单碱基突变—的存在,取得了令人满意的实验结果。检测下限为,在甇絣的目标ǘ确段Ю锩妫流信号与目标物浓度对数呈现良好的线性关系,结果表明,此方法是一种简单快速而且比较灵敏的适用于单碱基突变检测的技术,具有较强的通用性。谌迪至艘恢只贒修饰的小分子目标物检测方法,该法应用了一条修饰了目标小分子的巯基化的杂交链,当加入含有目标物贿胚嵋宜的样品预先反应一段时间后,样品中的游离梢愿从σ褐械腎抗体蛋白相结硕貉江论文
合,从而阻碍后续反应抗体与衍生的慕岷希谑芹匣难苌纯梢宰宰装到石英晶振砻妫酉吕赐ü咏环从蜕锼匾磺缀退刈饔靡肜备过氧化酶,通过酶催化沉积作用产生增强的压电信号响应。此方法不仅比传统的方法更有效灵敏地监测了肟固宓慕岷献饔靡约岸糠治鯥,而且这个新颖的理念为我们以后检测其他的小分子提供了一个新的平台。实验结果表明,此方法是一种价格低廉、选择性高、灵敏度高的适用于小分子目标物分析检测的技术。谒恼关键词:发夹探针:压电方法:核酸内切酶:基因突变点分析:电化学分子开关‘奘危盒》肿蛹觳琏了:发兴探针基冈突变点分析’奘瘟嗖庑》至