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杂合抗菌肽的设计改造、真核表达及性质研究.pdf

上传人:coconut 2014/2/12 文件大小:0 KB

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文档介绍

文档介绍:四,』大学硕士学位论文姜堑生全盘茔芏堕目墨全垫亘壁盟选盐丝堡、盎撞盘垫垦:睦厦盟窒作者完成日期生盏煎塾蕉丛生盐鲎研究方向生月培养单位指导教师丝生堑坌瞪授予学位日期题专业
鼻,,午二桫乃膨:善钓声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期问在导师指导下取得的,论文成果归四川笱校卮松鳌四川人学硕宦畚
杂合抗菌肽的设计改造、真核表达及性质研究中文摘要指导教师曹毅在医药和农业等相关领域有广阔的应用前景。杂合抗菌肽是一类新型抗菌肽,短等特点。人工设计杂合肽是研究的热点之一,即选择一种抗菌肽为蓝本,对的改造的抗菌肽具有与蓝本相似或更高的活性,毒酎作用降低,而且变短的肽成法的成本较高、原核表达产物可能导致活性丧失并对宿主有害且难以纯化等预期效果;其中茸鯰蚆煌蔚钠唇樱晒Φ纳秆到了几种肽链变短而活性较强的杂合肽,.褪瞧渲械囊桓觯杭⒃,设计了新太.,,与刀相比,肽链的第微生物学专业研究生姜新抗菌肽因其杀菌的高效性、广谱性和不易产生耐药性等特点受到广泛关注,它由来自两种或多种抗菌肽的部分肽链组成,具有高效、广谱、低毒、肽链较某些氨基酸做删减替换或与另外一种抗菌肽的片段拼接。研究表明,一些经过链为降低合成成本也奠定了基础。为了解决抗菌肽直接提取纯化困难、化学合问题,选择真核表达系统成为基因工程表达抗菌肽的理想选择。因此,探索并设计新肽,改善原有抗菌肽的活性,降低或消除他们的溶血性。高效表达目的小肽对解决目前抗菌肽存在的问题都有着重要的意义和实验价值。目前,源自不同蓝本的杂合抗茵肽研究颇多,,本实验开展了以下研究:墒祀腘端位氨基酸四位由缬氨酸取代亮氨酸,并对二者进行了生物信息学分析;参照毕赤巴斯德酵母的偏好密码子,
,利用ǹ寺≡雍峡咕幕颍詈蠼返幕蛐达蝝工和巍蝝淮送猓こ叹蚕允境龊芎玫囊糯榷ㄐ浴⒃;氨达条件优化。本章将——,在和柿!电转杯的情况下,宿主菌⒃⑿Ъ邸⑽榷ㄐ浴则稍高于:两者对丑目剐圆畋鸩淮螅涣街衷雍想亩季哂薪细的热稳定性,在中性偏酸的环境中活性较高,碱性环境中受到抑制;碱性环境中随着值逐渐增大,.幕钚允芤种瞥潭让挥蠧甅强烈;两种杂合肽在件,较强的阳离子性和两亲性也有积极的影响;这些因素是共同作用的,⑼ü盖醒橹ず驮俅尾庑颉了巴德毕赤酵母痗痑晒竦昧斯こ叹壕盏急泶锖托‰辭.⒌缪为⒏此蹦苋〉、%甲醇诱导、培养、栈竦奶跫拢街衷雍想牡谋泶锪靠抗菌谱及溶血性测定。实验结果表明,对甤.、畃畇裕珻幕钚愿哂贑狹:对、裕珻甅检测的浓度范围内没有表现出溶血性,.蚕薓旧斫锨康娜苎性。对杂合抗茵肽的预测和实验结果分析表明,菪强咕幕钚缘谋匾L方面与活性无线性关系。关键词:杂合抗菌肽毕赤酵母分泌表达抑菌活性抗菌谱明川人学坝卜’宦畚
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这些菌株并以惊人的速度变异传播,以至于结核病这些原本得以控制的疾病大热点,在医药和农业等相关领域有巨大的应用潜力。,简称是在诱导的条件下,动物免疫防御系统产生的一类对抗外源性病原体的肽类活性物质,存在于多种生物体内,是动物免疫防御系统的一个重要组成部分。最早发现的抗菌肽是天蚕素笕嗣怯致叫⑾至多条来源于哺乳动物、昆虫、蛙类、植物、细菌、真菌等不同物种的抗菌肽。这些抗菌肽除了具有高效广谱的抗菌用于细菌细胞膜,导致膜的通透性增大,以此穿透并杀灭细菌;细菌必须改变膜的结构,即改变相当部分的基因才能产生抗性,而这几乎是不可能的。因此,抗菌肽具有重要的研究价值。根据来源不同,可分为哺乳动物抗菌肽、蛙类抗菌肽、昆虫抗菌肽、微生物抗菌肽、植物抗菌肽等几类。粲诶コ婵咕簦钤绶⑾钟谙Ч疟也属于昆虫抗菌肽,来源于蜜蜂毒液,由个氨基酸组成,分子量为凰且恢窒咝远嚯模欢猿菩员冉厦飨裕话被嶙槌墒杷团,.位氨基酸构成亲水基团;蜂毒素对革兰阳性菌和阴性菌都有很强的抑制作用,是典型的阳离子抗菌肽;但蜂毒素可直接与红细胞的膜脂作用而产生刖由于近年来滥用抗生素现象的逐渐