文档介绍：MTT 终极指南,站长原创,更多生命科学试验信息请访问
一、MTT 是什么
MTT 是一种粉末状化学试剂,全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetr
azoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:
噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。(可参考 Sigma,货号 M5655, Thiazolyl Blue Tetrazoli
um Bromide)
二、MTT 法用来做什么
简单地说:是一种检测细胞存活和生长的方法。
MTT 主要有两个用途
(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;
。
三、为何 MTT 可以用来做上述工作
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色
结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解
细胞中的甲瓒,用酶标仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT 结
晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD 值),来判断活细胞数量,OD 值
越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
四、实验所需材料
溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5mg/ml,须用 PBS 或生理盐水做溶剂。
市面上一般 MTT 的包装为 100mg,250mg 或 1g
对于 100mg 这样的小包装,厂家都是将 MTT 放入小管中的,个人建
议不要再用天平称量分装,而应该一次性将其全配制成溶液,如 100
mg 用 20mlPBS 来溶解。具休做法:预先在 50ml 离心管(没有的话,
可用培养瓶替代)加入 20ml PBS,从中先吸取 500-1000ul PBS 装入
含 MTT 的小管中,吹打若干次后将其移入 50ml 离心管,然后再混匀。
可以重复几次,以使小管中的 MTT 不残留于管内。将 MTT 完全混匀
后,用滤膜过滤以除去溶液里的细菌,分装避光(避光袋或是
黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20 度。按细胞培养板每孔需加 10ul
计算,一般每 96 孔板约需 1ml,所以分装时可考虑每管分装 1ml。
对于大包装,可按上述方法称取一部分溶解,也有人将粉剂分装在 E
P 管里,用的时候现配,直接往培养板中加。
注意事项:
z 在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
z 配成的 MTT 需要无菌,MTT 对菌很敏感
z MTT 一般最好现用现配,过滤后 4 度避光保存两周内(个人曾做过 4 度
避光保存 4 周的 MTT 溶液,效果仍然不错)有效,或配制成 5mg/ml 保存
在-20 度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、
锡箔纸包住避光以免分解。当 MTT 变为灰绿色时就绝对不能再用。
z MTT 有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.
甲瓒溶解液
二甲基亚砜 DMSO,可